| 中文摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-8页 |
| 前言 | 第8-11页 |
| 实验材料 | 第11-17页 |
| 实验方法 | 第17-47页 |
| 1.分子生物学实验方法 | 第17-21页 |
| 2.RNA制备和cDNA合成 | 第21-22页 |
| 3.变性条件下的蛋白电泳 | 第22-26页 |
| 4.半干法Western blot | 第26-28页 |
| 5.重组蛋白纯化 | 第28-30页 |
| 6.动物免疫 | 第30页 |
| 7.常规ELISA | 第30-33页 |
| 8.抗体纯化 | 第33页 |
| 9.单克隆抗体制备 | 第33-36页 |
| 10.MIF-Specific Sandwich ELISA | 第36-37页 |
| 11.酶活性测定 | 第37-38页 |
| 12.细胞生物学方法. | 第38-40页 |
| 13.Lipofectin2000介导真核细胞瞬时转染 | 第40页 |
| 14.恶性疟原虫体外培养和同步化 | 第40-41页 |
| 15.人外周血单核细胞分离 | 第41-42页 |
| 16.单核细胞趋化实验 | 第42-43页 |
| 17.约氏疟原虫培养 | 第43页 |
| 18.疟原虫蛋白提取 | 第43页 |
| 19.Pfmif在不同恶性疟原虫虫株间多态性的检测 | 第43-44页 |
| 20.间接免疫荧光(IFA) | 第44页 |
| 21.免疫组化 | 第44-45页 |
| 22.小鼠体内实验 | 第45-47页 |
| 实验结果 | 第47-96页 |
| 实验流程图 | 第47-48页 |
| 1.Pfmif基因克隆和序列分析 | 第48-56页 |
| ·已经发现的MIF家族分子 | 第48-49页 |
| ·恶性疟原虫MIF同源分子的发现 | 第49-50页 |
| ·Pfmif基因序列分析 | 第50-51页 |
| ·PfMIF氨基酸序列分析 | 第51-54页 |
| ·Pfmif基因多态性鉴定 | 第54-55页 |
| ·Pfmif基因克隆 | 第55-56页 |
| 2.约氏疟原虫MIF(PyMIF)同源分子的发现和基因克隆 | 第56-59页 |
| 3.PfMIF/PyMIF三级结构预测 | 第59-61页 |
| 4.蛋白表达和纯化 | 第61-68页 |
| ·蛋白表达 | 第61页 |
| ·蛋白纯化 | 第61-68页 |
| 1) GST标签重组蛋白纯化 | 第61-63页 |
| 2) His标签重组蛋白纯化 | 第63-68页 |
| 5.多克隆抗体制备 | 第68-71页 |
| 6.单克隆抗体制备 | 第71-77页 |
| 7.体外培养的恶性疟原虫感染红细胞(PRBC)分泌PfMIF分子 | 第77-79页 |
| 8.体外转染真核细胞证实PfMIF分泌 | 第79-80页 |
| 9.Western blot | 第80-81页 |
| 10.间接免疫荧光观察PfMIF的分布 | 第81-83页 |
| 11.恶性疟原虫感染病人血清检测 | 第83-87页 |
| 12.酶活性检测 | 第87-89页 |
| 13.纯化低内毒素的PfMIF/HuMIF重组蛋白 | 第89页 |
| 14 PfMIF的细胞因子活性检测 | 第89-90页 |
| 15.感染小鼠体内PyMIF分子的检测 | 第90-92页 |
| 16.感染小鼠体内抗体水平的检测 | 第92页 |
| 17.感染小鼠体内注射PyMIF分子并观察其对感染过程的影响 | 第92-96页 |
| 讨论 | 第96-102页 |
| 结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-105页 |
| 文献综述一:巨噬细胞迁移抑制因子研究进展 | 第105-122页 |
| 文献综述二:CD4~+T细胞在抗疟原虫红内期免疫中的作用 | 第122-126页 |
| 附录 | 第126-131页 |
| 附录Ⅰ:本论文所用的英文缩略语 | 第126-127页 |
| 附录Ⅱ:PfMIF-His重组蛋白N末端测序报告 | 第127-130页 |
| 附录Ⅲ:硕博连读期间发表的文章和参加的会议 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131-132页 |
