| 第一部分 中文摘要 | 第1-9页 |
| 第二部分 英文摘要 | 第9-11页 |
| 第三部分 前言 | 第11-13页 |
| 第四部分 研究报告 | 第13-93页 |
| 实验一:HCMV UL49基因表达的初步鉴定 | 第13-29页 |
| 一、前言 | 第13-14页 |
| 二、技术路线 | 第14-15页 |
| 三、材料与方法 | 第15-21页 |
| 1.主要仪器 | 第15页 |
| 2.材料及试剂 | 第15-16页 |
| 3.实验内容与方法 | 第16-21页 |
| ·人胚肺成纤维细胞的培养 | 第16页 |
| ·病毒的感染及培养 | 第16页 |
| ·病毒的感染的鉴定 | 第16-17页 |
| ·HCMV UL49mRNA的检测 | 第17-21页 |
| 四、结果与分析 | 第21-26页 |
| 1.病毒的培养及鉴定 | 第21-23页 |
| ·HELF的培养 | 第21页 |
| ·病毒感染HELF后的CPE | 第21-22页 |
| ·病毒感染的PCR鉴定 | 第22-23页 |
| 2.HCMV UL49mRNA的鉴定 | 第23-26页 |
| ·RNA的抽提与纯化 | 第23-24页 |
| ·纯化RNA的鉴定 | 第24页 |
| ·HCMV UL49mRNA的检测 | 第24-25页 |
| ·不同感染时间UL49mRNA的检测 | 第25-26页 |
| 五、讨论 | 第26-29页 |
| 1.关于病毒的培养与鉴定 | 第26页 |
| 2.HCMV UL49mRNA的检测 | 第26-27页 |
| 3.HCMV UL49基因表达时相的初步鉴定 | 第27-28页 |
| 4.HCMV UL49基因编码蛋白的功能预测 | 第28-29页 |
| 实验二:EGS的设计及胞外初筛 | 第29-59页 |
| 一、前言 | 第29-30页 |
| 二、技术路线 | 第30-31页 |
| 三、材料与方法 | 第31-41页 |
| 1.实验涉及的主要仪器 | 第31页 |
| 2.实验材料及试剂 | 第31-32页 |
| 3.实验内容与方法 | 第32-41页 |
| ·EGS的设计合成 | 第32-33页 |
| ·HCMV UL49基因的克隆及体外转录 | 第33-37页 |
| ·RNA marker的制备 | 第37-38页 |
| ·RNase P的提取及活性鉴定 | 第38-40页 |
| ·胞外切割实验 | 第40-41页 |
| 四、结果与分析 | 第41-54页 |
| 1.EGS的设计合成 | 第41-44页 |
| 2.HCMV UL49基因的克隆 | 第44-46页 |
| ·UL49基因的PCR扩增 | 第44页 |
| ·UL49基因克隆质粒(PU49)的鉴定 | 第44-45页 |
| ·UL49基因的体外转录 | 第45-46页 |
| 3.人类RNase P的提取及活性鉴定 | 第46-48页 |
| ·RNase P的提取 | 第46页 |
| ·RNase P底物的制备 | 第46-48页 |
| ·最佳切割时间的确定 | 第48页 |
| ·梯度洗脱过程中RNase P活性的检测 | 第48页 |
| 4.EGS胞外引导活性的检测 | 第48-54页 |
| 五、讨论 | 第54-59页 |
| 1.关于EGS的设计 | 第54页 |
| 2.胞外切割系统的建立 | 第54-56页 |
| ·RNase P的粗纯化 | 第55页 |
| ·RNase P的活性鉴定 | 第55页 |
| ·RNase P最佳反应条件的摸索 | 第55-56页 |
| 3.EGS的胞外筛选 | 第56-59页 |
| ·筛选库中各EGS引导切割活性的比较 | 第56-57页 |
| ·EGS引导切割的靶向性分析 | 第57-58页 |
| ·关于对照EGS(C-EGS) | 第58-59页 |
| 实验三:EGS的胞内复筛 | 第59-76页 |
| 前言 | 第59-60页 |
| 一、技术路线 | 第60-61页 |
| 二、材料与方法 | 第61-66页 |
| 1.实验涉及的主要仪器 | 第61页 |
| 2.实验材料及试剂 | 第61-62页 |
| 3.实验内容与方法 | 第62-66页 |
| ·pUL49/EGFP-N1融合蛋白表达载体的构建 | 第62-64页 |
| ·EGS的制备 | 第64页 |
| ·红色荧光表达载体(pDsRed2-Cl)的制备 | 第64-65页 |
| ·共转染 | 第65页 |
| ·荧光观察与检测 | 第65-66页 |
| 三、结果与分析 | 第66-73页 |
| 1.UL49基因PCR扩增产物的电泳鉴定 | 第66页 |
| 2.pUL49/EGFP-N1重组质粒的鉴定 | 第66-67页 |
| 3.EGS抑制UL49基因表达活性的检测 | 第67-72页 |
| ·荧光显微镜观察 | 第67-69页 |
| ·Typhoon9200荧光扫描 | 第69-70页 |
| ·流式细胞检测 | 第70-72页 |
| 4.EGS抑制UL49基因表达的浓度因素 | 第72-73页 |
| 四、讨论 | 第73-76页 |
| 实验四:EGS胞内抗病毒活性的鉴定 | 第76-93页 |
| 一、技术路线 | 第77-78页 |
| 二、材料与方法 | 第78-84页 |
| 1.主要仪器 | 第78页 |
| 2.材料及试剂 | 第78-79页 |
| 3.实验内容与方法 | 第79-84页 |
| ·人胚肺成纤维细胞(HELF)的培养 | 第79页 |
| ·EGS的脂质体转染 | 第79页 |
| ·EGS对HCMV基因表达的抑制作用 | 第79-82页 |
| ·EGS对病毒增殖曲线的影响 | 第82-84页 |
| 三、结果与分析 | 第84-89页 |
| 1.逆转录产物的鉴定 | 第84页 |
| 2.病毒DNA的鉴定 | 第84-85页 |
| 3.HCMV感染细胞内UL49mRNA的定量检测 | 第85-86页 |
| 4.HCMV增殖曲线的测定 | 第86-88页 |
| ·标准曲线的制备 | 第86页 |
| ·熔解曲线的测定 | 第86-87页 |
| ·病毒增殖曲线的测定 | 第87-88页 |
| 5.UL49 mRNA水平的下调对HCMV其他基因表达的影响 | 第88-89页 |
| 四、讨论 | 第89-93页 |
| 第五部分 小结 | 第93-94页 |
| 第六部分 参考文献 | 第94-98页 |
| 第七部分 文献综述 | 第98-136页 |
| 综述一:HCMV的病原生物学 | 第98-114页 |
| 一、病毒学特征 | 第98-101页 |
| 二、流行病学特点 | 第101-102页 |
| 三、致病性 | 第102-104页 |
| 四、免疫性 | 第104-107页 |
| 五、HCMV感染的诊断 | 第107-109页 |
| 六、HCMV感染的治疗 | 第109-110页 |
| 七、HCMV感染的预防 | 第110-114页 |
| 综述二:反义技术及其在抗病毒研究领域的应用 | 第114-125页 |
| 一、反义技术的创建及其策略 | 第114页 |
| 二、反义技术的类型 | 第114-118页 |
| 三、反义技术中的关键问题 | 第118-121页 |
| 四、反义技术在抗病毒研究中的应用 | 第121-122页 |
| 五、结束语 | 第122-125页 |
| 综述三:核酶作用机制的研究进展 | 第125-136页 |
| 一、大分子核酶 | 第125-129页 |
| 二、小分子核酶 | 第129-133页 |
| 三、其他核酶 | 第133-136页 |
| 第八部分 附录 | 第136-146页 |
| 附录一 缩略词中英文对照 | 第136-137页 |
| 附录二 基因序列 | 第137-143页 |
| 1.PU49质粒的测序结果 | 第137-138页 |
| 2.ptRNA~(ser)克隆质粒的测序结果 | 第138-139页 |
| 3.pUL49/EGFP-N1质粒的测序结果 | 第139-140页 |
| 4.HCMV(AD169)UL49在genebank登录的序列 | 第140-143页 |
| 附录三 溶液配方 | 第143-144页 |
| 附录四 其他 | 第144-146页 |
| 第九部分 致谢 | 第146页 |
