中文摘要 | 第1-4页 |
英文摘要 | 第4-8页 |
前言 | 第8-28页 |
第一章 材料与方法 | 第28-40页 |
·材料 | 第28-31页 |
·病毒 | 第28页 |
·质粒和菌种 | 第28页 |
·工具酶、试剂盒及生化药品 | 第28页 |
·引物 | 第28页 |
·质粒提取试剂配制 | 第28-29页 |
·制备感受态细胞用的试剂 | 第29-30页 |
·培养基配制 | 第30页 |
·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第30-31页 |
·仪器 | 第31页 |
·方法 | 第31-40页 |
·PET-G表达载体的构建 | 第31-35页 |
·ERA株的处理 | 第31-32页 |
·RT-PCR总病毒RNA提取 | 第32页 |
·RT-PCR扩增G基因 | 第32-33页 |
·回目的片段 | 第33页 |
·G基因与T载体连接 | 第33-34页 |
·转化 | 第34页 |
·筛选与培养 | 第34页 |
·抽提质粒 | 第34页 |
·酶切鉴定质粒PMDT-G | 第34-35页 |
·酶切原核表达载体PET-32a | 第35页 |
·连接G基因与PET-32a | 第35页 |
·酶切鉴定质粒PET-G | 第35页 |
·口腔细菌的分离与鉴定 | 第35-36页 |
·采集口腔细菌 | 第35-36页 |
·纯化口腔细菌 | 第36页 |
·保存细菌 | 第36页 |
·口腔细菌的鉴定 | 第36页 |
·口腔细菌的转化 | 第36-40页 |
·化学转化法感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
·电转化法感受态细胞的制备 | 第37页 |
·革兰氏阴性细菌的转化 | 第37-38页 |
·革兰氏阳性细菌的转化 | 第38页 |
·筛选与培养 | 第38页 |
·抽提质粒鉴定 | 第38-40页 |
第二章 实验结果 | 第40-49页 |
·RT-PCR扩增狂犬病病毒ERA株的G基因结果 | 第40页 |
·G基因克隆到PMD-T载体以及酶切鉴定结果 | 第40-41页 |
·G基因亚克隆到PET-32a表达载体以及酶切鉴定结果 | 第41页 |
·口腔细菌的分离和鉴定结果 | 第41-49页 |
第三章 讨论 | 第49-51页 |
·程研究背景与目的、意义的关系 | 第49页 |
·口腔细菌分离存在的主要问题以及解决办法 | 第49页 |
·感受态细胞研究过程中出现的问题以及解决办法 | 第49页 |
·转化出现的问题以及解决方法 | 第49-50页 |
·下一步要的工作方向 | 第50-51页 |
第四章 小结 | 第51-52页 |
参考文献 | 第52-60页 |
致谢 | 第60页 |