| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-24页 |
| ·趋化因子与肿瘤生物学 | 第10-17页 |
| ·趋化因子及其受体 | 第10-14页 |
| ·趋化因子与肿瘤生长及转移 | 第14-17页 |
| ·CXCR4研究概况 | 第17-22页 |
| ·CXCR4结构 | 第17-19页 |
| ·CXCL12-CXCR4生物轴 | 第19-22页 |
| ·本研究目的与意义 | 第22-24页 |
| 第二章 人趋化因子受体CXCR4基因的克隆和表达 | 第24-44页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·血液标本 | 第24页 |
| ·菌株与质粒 | 第24页 |
| ·抗生素与培养基 | 第24页 |
| ·常用贮存液 | 第24-25页 |
| ·常用缓冲液 | 第25-27页 |
| ·酶及主要生化试剂 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-36页 |
| ·目的基因的克隆以及重组表达质粒的构建策略 | 第28-29页 |
| ·血液PBMC的制备 | 第29页 |
| ·细胞总RNA的提取及鉴定 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR获取cxcr4全长开放阅读框序列 | 第30-31页 |
| ·PCR产物和限制性酶切DNA片段的回收 | 第31页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第31-32页 |
| ·DNA限制性内切酶消化 | 第32页 |
| ·DNA片段的连接 | 第32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第32-33页 |
| ·α互补法筛选阳性克隆 | 第33-34页 |
| ·蛋白质原核表达 | 第34页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE分析 | 第34页 |
| ·目的蛋白的大量制备及分离纯化 | 第34-35页 |
| ·多抗制备纯化与效价测定 | 第35-36页 |
| ·结果及分析 | 第36-41页 |
| ·CXCR4编码序列的获得 | 第36-37页 |
| ·重组质粒pMD-cxcr4的构建及鉴定 | 第37-38页 |
| ·重组表达质粒pET-cxcr4的构建及鉴定 | 第38-39页 |
| ·CXCR4编码基因在E.coli BL21中的表达与鉴定 | 第39页 |
| ·cxcr4 ORF序列的测定 | 第39-40页 |
| ·CXCR4抗体效价测定 | 第40-41页 |
| ·小结 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 CXCR4在乳腺癌中的表达研究 | 第44-53页 |
| ·实验材料 | 第44页 |
| ·病理组织及血清标本 | 第44页 |
| ·主要缓冲液和生化试剂 | 第44页 |
| ·实验方法 | 第44-46页 |
| ·免疫组化测定CXCR4在乳腺癌中的表达及细胞定位 | 第44-45页 |
| ·血清CXCR4检测 | 第45-46页 |
| ·结果与分析 | 第46-50页 |
| ·CXCR4蛋白在乳腺癌组织中的表达分析 | 第46-49页 |
| ·乳腺癌血清CXCR4的测定结果 | 第49-50页 |
| ·小结 | 第50-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 硕士期间发表的论文 | 第61-62页 |
| 致谢 | 第62页 |