| 摘要 | 第1-11页 |
| ABSTRACT | 第11-13页 |
| 主要英文缩写词 | 第13-14页 |
| 第一篇 文献综述部分 | 第14-64页 |
| 第一章 抗体的结构与功能 | 第14-33页 |
| 1 抗体的分子结构 | 第14-23页 |
| 1．1 抗体分子的基本结构 | 第14-16页 |
| 1．2 抗体分子的功能区结构 | 第16-18页 |
| 1．3 免疫球蛋白超家族 | 第18-19页 |
| 1．4 免疫球蛋白的不均一性 | 第19-23页 |
| 2 抗体分子的基因结构和重排 | 第23-31页 |
| 2．1 抗体基因的基本结构 | 第23-27页 |
| 2．2 可变区基因的重组及其机制 | 第27-30页 |
| 2．3 抗体多样性的来源 | 第30-31页 |
| 3 抗体的生物学功能 | 第31-33页 |
| 3．1 特异性结合相应抗原 | 第31页 |
| 3．2 效应功能 | 第31-32页 |
| 3．3 通过胎盘 | 第32-33页 |
| 第二章 抗体库技术研究进展 | 第33-49页 |
| 1 噬菌体抗体库技术 | 第34-41页 |
| 1．1 噬菌体展示技术系统 | 第34-35页 |
| 1．2 噬菌体抗体技术的操作方法 | 第35-40页 |
| 1．3 噬菌体展示技术的特点与优势 | 第40-41页 |
| 2 核糖体展示抗体库 | 第41-49页 |
| 2．1 核糖体展示技术的发展 | 第42-43页 |
| 2．2 核糖体展示技术的原理 | 第43-49页 |
| 第三章 血管内皮生长因子受体-2及其信号转导作用的研究进展 | 第49-55页 |
| 1 KDR在血管生成中起主导作用 | 第50-51页 |
| 2 KDR介导肿瘤血管生成 | 第51页 |
| 3 KDR信号转导与血管生成及维持 | 第51-53页 |
| 3．1 KDR信号转导与内皮细胞存活 | 第51-52页 |
| 3．2 KDR信号转导与内皮细胞增殖 | 第52页 |
| 3．3 KDR信号转导与内皮细胞迁移 | 第52-53页 |
| 3．4 KDR信号转导与内皮细胞渗透性改变 | 第53页 |
| 4 以KDR及其通路为靶点的抗肿瘤治疗 | 第53-54页 |
| 5 结语 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-64页 |
| 第二篇 试验部分 | 第64-142页 |
| 第一章 概述 | 第64-67页 |
| 第二章 肺癌患者外周血淋巴细胞的分离与CDNA的合成 | 第67-73页 |
| 1 试验策略 | 第67-68页 |
| 2 试验材料与设备 | 第68-69页 |
| 2．1 试验材料 | 第68页 |
| 2．2 试验设备 | 第68-69页 |
| 3 试验方法 | 第69-71页 |
| 3．1 从人外周血分离淋巴细胞 | 第69页 |
| 3．1 总细胞RNA的提取 | 第69-70页 |
| 3．3 RNA甲醛变性电泳 | 第70页 |
| 3．4 cDNA的合成 | 第70-71页 |
| 4 试验结果与讨论 | 第71-72页 |
| 4．1 测定样品在260nm和280nm的吸收值确定RNA的质量 | 第71页 |
| 4．2 血样和RNA的质量控制 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-73页 |
| 第三章 肺癌人源单链抗体库的构建及库质量的评定 | 第73-102页 |
| 1 构建策略 | 第74-75页 |
| 2 试验材料与设备 | 第75-79页 |
| 2．1 试验材料 | 第75-79页 |
| 2．2 主要试验设备 | 第79页 |
| 3 试验方法 | 第79-87页 |
| 3．1 PCR克隆抗体基因片段 | 第79页 |
| 3．2 V_H-linker的PCR扩增 | 第79-80页 |
| 3．3 Vκ的PCR扩增 | 第80页 |
| 3．4 Vλ的PCR扩增 | 第80页 |
| 3．5 Cκ的PCR扩增 | 第80-81页 |
| 3．6 单链抗体(scFv)基因的拼接 | 第81-83页 |
| 3．7 从琼脂糖胶中回收DNA片段 | 第83-84页 |
| 3．8 连接反应 | 第84页 |
| 3．9 用氯化钙法制备感受态细胞 | 第84-85页 |
| 3．10 转化 | 第85页 |
| 3．11 质粒提取操作步骤 | 第85-86页 |
| 3．12 测序与序列分析 | 第86页 |
| 3．13 用DNA fingerprinting技术对单链抗体库多样性进行分析 | 第86-87页 |
| 3．14 单链抗体库库容量的计算方法 | 第87页 |
| 4 试验结果与讨论 | 第87-99页 |
| 4．1 关于引物 | 第87-88页 |
| 4．2 V_H-linker、Vκ、Vλ和Cκ的PCR扩增结果 | 第88-90页 |
| 4．3 V_H-linker基函与Vκ基因的拼接和V_H-linker基因与Vλ基因、Cκ基因的拼接 | 第90-92页 |
| 4．4 DNA fingerprinting技术对单链抗体库多样性进行分析及库容量的计算 | 第92-93页 |
| 4．5 序列分析 | 第93-99页 |
| 5 小结 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-102页 |
| 第四章 运用核糖体展示技术对肺癌人源单链抗体库的筛选研究 | 第102-116页 |
| 1 筛选策略 | 第103-104页 |
| 2 试验材料与设备 | 第104-106页 |
| 2．1 试验材料 | 第104-106页 |
| 2．2 试验设备 | 第106页 |
| 3 试验方法 | 第106-109页 |
| 3．1 抗原-磁珠的制备 | 第106-107页 |
| 3．2 运用核糖体展示系统对单链抗体库进行筛选 | 第107-108页 |
| 3．3 连接反应 | 第108页 |
| 3．4 感受态细胞的制备 | 第108页 |
| 3．5 转化 | 第108-109页 |
| 3．6 质粒提取 | 第109页 |
| 3．7 测序和序列分析 | 第109页 |
| 3．8 所有试验所需要分子生物学溶液的配制 | 第109页 |
| 4 试验结果与讨论 | 第109-113页 |
| 4．1 体外无细胞翻译系统 | 第109页 |
| 4．2 镁离子浓度和温度 | 第109-110页 |
| 4．3 筛选效果 | 第110页 |
| 4．3 序列分析 | 第110-113页 |
| 5 小结 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-116页 |
| 第五章 抗VEGFR-2单链抗体的克隆、表达及其功能分析 | 第116-128页 |
| 1 试验材料与设备 | 第116-118页 |
| 1．1 试验材料 | 第116-118页 |
| 1．2 试验设备 | 第118页 |
| 2 试验方法 | 第118-124页 |
| 2．1 Anti-VEGFR-2 scFv基因的扩增 | 第118-119页 |
| 2．2 连接反应、转化反应、阳性重组子的筛选和重组质粒的提取 | 第119页 |
| 2．3 重组质粒的酶切 | 第119页 |
| 2．4 表达载体的酶切 | 第119-120页 |
| 2．5 连接 | 第120页 |
| 2．6 感受态细胞的制备与转化 | 第120页 |
| 2．7 阳性质粒的筛选 | 第120页 |
| 2．8 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第120-121页 |
| 2．9 目的蛋白表达量的测定 | 第121页 |
| 2．10 表达产物的分离、纯化和复性 | 第121-122页 |
| 2．11 纯化Anti-VEGFR-2单链抗体的含量测定 | 第122页 |
| 2．12 抗体效价测定 | 第122-123页 |
| 2．13 抗体亲和力的测定 | 第123页 |
| 2．14 抗体亲和力测定结果计算 | 第123-124页 |
| 3 试验结果与讨论 | 第124-125页 |
| 3．1 Anti-VEGFR-2单链抗体在大肠杆菌BL21中的诱导表达 | 第124页 |
| 3．2 Anti-VEGFR-2单链抗体效价和抗体亲和力的检测 | 第124-125页 |
| 4 小结 | 第125-126页 |
| 参考文献 | 第126-128页 |
| 第六章 抗VEGFR-2单链抗体的同源模建 | 第128-133页 |
| 1 方法 | 第129-130页 |
| 1．1 预测工具 | 第129页 |
| 1．2 结果显示 | 第129页 |
| 1．3 分析过程 | 第129-130页 |
| 2 结果与讨论 | 第130-131页 |
| 3 小结 | 第131-132页 |
| 参考文献 | 第132-133页 |
| 第七章 原子力显微镜对抗VEGFR-2单链抗体与抗原VEGFR-2相互作用的表征 | 第133-142页 |
| 1 AFM简介 | 第133-135页 |
| 1．1 AFM特点 | 第133-134页 |
| 1．2 AFM原理 | 第134页 |
| 1．3 AFM扫描技术要求 | 第134-135页 |
| 2 材料与设备 | 第135页 |
| 2．1 试验材料 | 第135页 |
| 2．2 试验设备 | 第135页 |
| 3 试验方法 | 第135-136页 |
| 3．1 云母片的前处理 | 第135页 |
| 3．2 单链抗体溶液的吸收 | 第135-136页 |
| 3．3 单链抗体-抗原免疫复合物的观察 | 第136页 |
| 3．4 原子力显微镜观察 | 第136页 |
| 4 结果与讨论 | 第136-139页 |
| 5 小结 | 第139页 |
| 参考文献 | 第139-142页 |
| 总结、创新点及后续研究展望 | 第142-143页 |
| 附录一 | 第143-144页 |
| 附录二 | 第144-145页 |
| 附录三 | 第145-149页 |
| 攻读博士学位期间发表及待发表的论文 | 第149-150页 |
| 致谢 | 第150页 |
