| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-15页 |
| 1 引言 | 第15-25页 |
| ·苹果中的α-法尼烯 | 第16-18页 |
| ·α-法尼烯与虎皮病 | 第16-17页 |
| ·α-法尼烯与昆虫诱导 | 第17-18页 |
| ·α-法尼烯的代谢途径 | 第18-21页 |
| ·α-法尼烯代谢的分子调控 | 第21-23页 |
| ·研究的前景及展望 | 第23-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-52页 |
| ·实验材料与处理 | 第25-26页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·材料处理 | 第25页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·酶及生化试剂 | 第25页 |
| ·PCR引物 | 第25-26页 |
| ·实验方法 | 第26-52页 |
| ·CTAB法提取苹果果皮总RNA | 第26-27页 |
| ·RNA反转录 | 第27-28页 |
| ·苹果AFS基因cDNA的分离 | 第28-30页 |
| ·PCR扩增AFS cDNA | 第28-29页 |
| ·PCR产物的回收纯化 | 第29-30页 |
| ·回收片段末端加碱基A | 第30页 |
| ·苹果AFS基因的克隆与测序 | 第30-34页 |
| ·连接反应 | 第31页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·转化及克隆筛选 | 第31-32页 |
| ·碱法小量提取质粒DNA及酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·酶切鉴定 | 第33-34页 |
| ·序列测定 | 第34页 |
| ·Northern杂交 | 第34-37页 |
| ·RNA 提取 | 第34页 |
| ·甲醛变性胶电泳 | 第34-35页 |
| ·转膜 | 第35-36页 |
| ·预杂交 | 第36页 |
| ·探针的制备 | 第36-37页 |
| ·Southern杂交 | 第37-40页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第38页 |
| ·基因组 DNA 的限制性内切酶消化 | 第38-39页 |
| ·电泳及转膜 | 第39页 |
| ·预杂交 | 第39-40页 |
| ·探针制备 | 第40页 |
| ·杂交 | 第40页 |
| ·洗膜及压片 | 第40页 |
| ·HPLC 检测苹果果皮中的α-法尼烯含量 | 第40-41页 |
| ·植物表达载体的构建 | 第41-43页 |
| ·碱法大量提取质粒DNA | 第41-42页 |
| ·载体构建 | 第42-43页 |
| ·根癌农杆菌LBA4404感受态细胞的制备及转化 | 第43-45页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第43页 |
| ·冻融法转化农杆菌 | 第43-44页 |
| ·利用农杆菌介导转化烟草 | 第44-45页 |
| ·转基因烟草植株的PCR 检测 | 第45-47页 |
| ·CTAB 法微量法提取基因组DNA | 第45-46页 |
| ·转基因植株的PCR 筛选 | 第46-47页 |
| ·转基因植株的检测 | 第47-48页 |
| ·利用TRIZOL试剂盒提取RNA | 第47-48页 |
| ·RNA 反转录 | 第48页 |
| ·PCR 检测 | 第48页 |
| ·转基因烟草膜脂组分及光合指标测定 | 第48-49页 |
| ·膜脂组分的测定 | 第48页 |
| ·温度响应曲线的测定 | 第48页 |
| ·材料处理 | 第48-49页 |
| ·叶片光合参数的测定 | 第49页 |
| ·荧光参数的测定 | 第49页 |
| ·O_2 释放量的测定 | 第49页 |
| ·原核表达载体构建 | 第49-52页 |
| ·AFS 编码区基因的克隆 | 第49-50页 |
| ·表达载体构建 | 第50页 |
| ·AFS 原核表达的诱导 | 第50页 |
| ·聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第50-52页 |
| 3 结果与分析 | 第52-73页 |
| ·苹果 AFS 基因的克隆 | 第52-54页 |
| ·苹果果皮 RNA 的提取及反转录 | 第52页 |
| ·AFS基因的分离 | 第52-54页 |
| ·AFS基因的序列分析 | 第54-60页 |
| ·AFS基因核甘酸序列以及推导的氨基酸序列 | 第54-55页 |
| ·AFS序列同源性比较分析 | 第55-60页 |
| ·基因表达特性分析 | 第60-64页 |
| ·苹果AFS 基因 Southern 杂交分析 | 第60-61页 |
| ·AFS基因在苹果冷藏不同时期的表达 | 第61-62页 |
| ·AFS基因在苹果冷藏出库后不同时期内的表达 | 第62-63页 |
| ·苹果果皮中α-法尼烯含量的 HPLC 检测 | 第63-64页 |
| ·AFS 基因正义表达载体的构建及烟草转化 | 第64-70页 |
| ·正义表达载体 PBI-AFS 的构建 | 第64页 |
| ·表达载体pBI-AFS的PCR及酶切鉴定 | 第64-66页 |
| ·AFS基因转化烟草及转基因植株的检测 | 第66-67页 |
| ·转基因烟草膜脂组分和光合参数分析 | 第67-70页 |
| ·转 AFS 基因烟草膜脂组分的变化 | 第67页 |
| ·转 AFS 基因烟草光合速率对温度的响应 | 第67-68页 |
| ·高温胁迫下转 AFS 基因烟草净光合速率的变化 | 第68页 |
| ·高温胁迫下转 AFS 基因烟草最大光化学效率的变化 | 第68-69页 |
| ·高温胁迫对转 AFS 基因烟草实际光化学效率的影响 | 第69-70页 |
| ·高温胁迫下转 AFS 基因烟草 O_2释放的变化 | 第70页 |
| ·AFS基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中诱导表达 | 第70-73页 |
| ·AFS基因原核表达载体的构建 | 第70-71页 |
| ·原核表达载体pET-AFS的PCR及酶切鉴定 | 第71-72页 |
| ·AFS在大肠杆菌中的诱导表达 | 第72-73页 |
| 4 讨论 | 第73-78页 |
| ·苹果 AFS 基因及其同源基因之间的序列分析 | 第73页 |
| ·苹果 AFS 基因的表达特征 | 第73-75页 |
| ·AFS基因在转基因烟草中的表达分析 | 第75-76页 |
| ·AFS基因在大肠杆菌中的表达分析 | 第76页 |
| ·进一步研究的设想 | 第76-78页 |
| 5 结论 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-92页 |
| 附录1 | 第92-93页 |
| 附录2 | 第93-97页 |
| 致谢 | 第97-98页 |
| 硕士期间发表及待发表文章 | 第98页 |
