| 第一部分 抗菌肽研究进展 | 第1-20页 |
| 1． 抗菌肽 | 第8-17页 |
| 1．1 抗菌肽的发现 | 第8页 |
| 1．2 抗菌肽的结构特点、分类及理化性质 | 第8-9页 |
| 1．3 抗菌肽的作用机理研究进展 | 第9-13页 |
| 1．4 抗菌肽的生物功能及药理作用 | 第13-14页 |
| 1．5 抗菌肽的应用前景 | 第14-16页 |
| 1．6 抗菌肽的来源 | 第16页 |
| 1．7 抗菌肽分子生物学研究进展 | 第16-17页 |
| 2． 抗菌肽基因工程 | 第17-18页 |
| 3． 抗菌肽转基因研究 | 第18-19页 |
| 4． 该课题实验的意义和研究内容 | 第19-20页 |
| 第二部分 材料和方法 | 第20-39页 |
| 1． 主要试剂与仪器 | 第20-22页 |
| 1．1 基本试剂及生产厂家 | 第20页 |
| 1．2 酶和其他试剂 | 第20页 |
| 1．3 本试验所用的菌株及质粒 | 第20页 |
| 1．4 主要仪器和厂家 | 第20-21页 |
| 1．5 试剂和培养基 | 第21-22页 |
| 1．5．1 试剂 | 第21页 |
| 1．5．2 培养基 | 第21-22页 |
| 1．5．3 抗生素 | 第22页 |
| 2． 实验方法 | 第22-39页 |
| 2．1 抗菌肽cecropin B的基因序列设计 | 第22-25页 |
| 2．2 抗菌肽cecropin B的序列合成 | 第25-28页 |
| 2．2．1 部分片段的设计和合成 | 第25-26页 |
| 2．2．2 CB全序列的人工合成实验步骤 | 第26-28页 |
| 2．3 CB的PCR产物纯化 | 第28-29页 |
| 2．4 测序载体pUC19的制备 | 第29-30页 |
| 2．5 目的CB片段和测序载体限制性酶切反应 | 第30页 |
| 2．5．1 DNA限制性内切酶酶切反应 | 第30页 |
| 2．5．2 测序载体pUC19的限制性内切酶酶切反应 | 第30页 |
| 2．6 CB-DNA酶切片段与pUC19酶切片段的酶连 | 第30-31页 |
| 2．7 测序载体的转化扩增 | 第31-35页 |
| 2．7．1 大肠杆菌JM109感受态的制备 | 第31-32页 |
| 2．7．2 pUC19-CB转化大肠杆菌JM109的感受态细胞 | 第32页 |
| 2．7．3 pUC19-CB质粒 DNA的筛选 | 第32-35页 |
| 2．8 目的片段CB与表达载体pPIC9K的连接及转化 | 第35-37页 |
| 2．8．1 酶切 | 第35-36页 |
| 2．8．2 酶连 | 第36页 |
| 2．8．3 转化和筛选 | 第36-37页 |
| 2．9 酵母的转导 | 第37-39页 |
| 2．9．1 Pichia pastoris SMD1168感受态细胞的准备 | 第37页 |
| 2．9．2 电激转化 | 第37页 |
| 2．9．3 阳性克隆的筛选 | 第37-38页 |
| 2．9．4 重组酵母的诱导表达试验 | 第38-39页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第39-44页 |
| 1． CB的合成 | 第39-40页 |
| 1．1 片段1与片段 2PCR结果和片段3与片段4的PCR结果 | 第39页 |
| 1．2 CB全长的PCR结果 | 第39-40页 |
| 2． CB-DNA酶切片段与pUC19酶切片段的酶连结果的 PCR鉴定 | 第40页 |
| 3． pUC19载体中 CB片段全长的测序结果 | 第40页 |
| 4． 酵母的转化及筛选 | 第40-42页 |
| 4．1 重组型质粒转化酵母细胞 | 第40-41页 |
| 4．2 重组酵母株的PCR鉴定 | 第41-42页 |
| 5． 表达产物抗菌肽抗菌活性的测定结果 | 第42-44页 |
| 5．1 新型抗菌肽对软腐病菌 E．carotovora的抑菌结果 | 第42-43页 |
| 5．2 新型抗菌肽对烟草青枯病菌Pseudomonas solanaceaom pv tabaci的抑菌结果 | 第43-44页 |
| 第四部分 讨论 | 第44-51页 |
| 1． 新型抗菌肽基因的设计创新 | 第44页 |
| 1．1 新型抗菌肽基因与天蚕素抗菌肽 Cecropin B基因的同源性对比 | 第44页 |
| 1．2 抗菌效果 | 第44页 |
| 1．3 应用前景 | 第44页 |
| 2． 表达系统 | 第44-50页 |
| 2．1 Pichia．pasteoris 基因表达系统研究进展 | 第44-46页 |
| 2．2 表达载体的构成 | 第46-47页 |
| 2．3 表达载体与宿主染色体的整合 | 第47-48页 |
| 2．4 影响外源基因表达量的因素 | 第48-49页 |
| 2．5 本次实验表达酵母-Pichia．pasteoris SMD1168的特点 | 第49页 |
| 2．6 表达载体pPIC9K的特点 | 第49-50页 |
| 3． 本次实验的不足 | 第50页 |
| 4． 下一步打算 | 第50-51页 |
| 第五部分 结论 | 第51-52页 |
| 第六部分 参考文献 | 第52-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
