中文摘要 | 第1-7页 |
外文摘要 | 第7-9页 |
引言 | 第9-20页 |
1 抗除草剂基因工程研究概况 | 第9-13页 |
2 外源基因表达载体的构建 | 第13-14页 |
3 小麦遗传转化方法的研究进展 | 第14-17页 |
4 研究意义和研究内容 | 第17-20页 |
材料与方法 | 第20-34页 |
1 试验材料 | 第20-21页 |
2 试验方法 | 第21-34页 |
·bar基因的克隆 | 第21-26页 |
·原核表达载体构建、转化及表达蛋白的鉴定 | 第26-28页 |
·真核表达载体pBI121-bar构建及转化农杆菌LBA4404 | 第28-30页 |
·农杆菌转化小麦体系的研究 | 第30-34页 |
结果与分析 | 第34-54页 |
1 bar基因克隆 | 第34-39页 |
·涂叶检测 | 第34页 |
·小麦基因组DNA的提取 | 第34页 |
·bar基因的PCR扩增与检测 | 第34-36页 |
·重组质粒的鉴定 | 第36-38页 |
·bar基因序列的测定 | 第38-39页 |
2 原核表达载体构建及表达蛋白的鉴定 | 第39-45页 |
·原核表达载体pET32a-bar的构建 | 第39-41页 |
·细胞总蛋白分析 | 第41-44页 |
·DTNB比色法鉴定表达蛋白酶(PAT)活性 | 第44-45页 |
3 真核表达载体pBI121-bar构建及转化农杆菌LBA4404 | 第45-49页 |
·中间载体的构建 | 第45-46页 |
·真核表达载体pBI121-bar构建 | 第46-48页 |
·真核表达载体pBI121-bar转化农杆菌LBA4404(工程菌株的构建) | 第48-49页 |
4 农杆菌转化小麦体系的研究 | 第49-54页 |
·小麦再生体系的研究 | 第49-52页 |
·遗传转化体系的研究 | 第52-54页 |
讨论 | 第54-59页 |
1 PCR克隆 | 第54-55页 |
2 原核生物中表达 | 第55-56页 |
3 真核表达载体的构建及转化农杆菌 | 第56页 |
4 农杆菌转化小麦体系的研究 | 第56-59页 |
结论 | 第59-60页 |
参考文献 | 第60-67页 |
附图 | 第67-69页 |
致谢 | 第69-70页 |
作者简介 | 第70页 |