| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 1 前言 | 第8-19页 |
| 1．1 文献综述 | 第8-18页 |
| 1．1．1 植物基因工程载体的构建 | 第8-9页 |
| 1．1．1．1 植物基因工程载体的种类和特征 | 第8页 |
| 1．1．1．2 Ti质粒载体 | 第8-9页 |
| 1．2．1． 植物抗病毒基因工程的技术路线与应用 | 第9-15页 |
| 1．2．1．1 CP基因及其应用 | 第10-11页 |
| 1．2．1．2 复制酶基因介导的抗性 | 第11-12页 |
| 1．2．1．3 核糖体失活蛋白基因及其应用 | 第12页 |
| 1．2．1．4 卫星RNA介导的抗性 | 第12页 |
| 1．2．1．5 核酶策略 | 第12-13页 |
| 1．2．1．6 反义RNA | 第13页 |
| 1．2．1．7 缺陷干扰颗粒介导的抗性 | 第13-15页 |
| 1．2．2 关于马铃薯抗卷叶病毒的研究 | 第15-18页 |
| 1．2．2．1 马铃薯卷叶病毒概述 | 第15页 |
| 1．2．2．2 传统抗病育种的研究 | 第15页 |
| 1．2．2．3 抗PLRV基因工程的研究 | 第15-18页 |
| 1．2 研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 实验试剂与材料 | 第19页 |
| 2．1． 试剂 | 第19页 |
| 2．2． 菌种和质粒 | 第19页 |
| 2．3． 实验材料 | 第19页 |
| 3 实验方法 | 第19-25页 |
| 3．1 植物表达载体的构建 | 第19-22页 |
| 3．1．1 质粒pLR56的转化与酶切鉴定 | 第19-20页 |
| 3．1．1．1 质粒的转化 | 第19页 |
| 3．1．1．2 碱裂解法提取质粒 | 第19页 |
| 3．1．1．3 质粒的酶切鉴定 | 第19-20页 |
| 3．1．2 酶切与回收 | 第20页 |
| 3．1．2．1 载体质粒DNA的处理 | 第20页 |
| 3．1．2．2 目的基因的获取 | 第20页 |
| 3．1．3 酶连与转化 | 第20页 |
| 3．1．3．1 一次连接 | 第20页 |
| 3．1．3．2 二次连接 | 第20页 |
| 3．1．3．3 转化 | 第20页 |
| 3．1．4 转化菌落的快速鉴定 | 第20-21页 |
| 3．1．5 亚克隆质粒pROKⅡ56的酶切鉴定 | 第21页 |
| 3．1．6 转化子的PCR检测。 | 第21页 |
| 3．1．7 将亚克隆质粒pROKⅡ56导入根癌农杆菌 | 第21-22页 |
| 3．1．7．1 三亲融合法 | 第21-22页 |
| 3．1．7．2 直接导入法 | 第22页 |
| 3．1．7．3 PCR法检测 | 第22页 |
| 3．1．8 菌种的保存 | 第22页 |
| 3．2 再生系统的筛选 | 第22-23页 |
| 3．2．1 获得一致的基础苗 | 第22页 |
| 3．2．2 壮苗快速繁殖 | 第22页 |
| 3．2．3 愈伤组织与芽诱导培养基的筛选 | 第22-23页 |
| 3．3 遗传转化系统的优化 | 第23-25页 |
| 3．3．1 选择压力的比较 | 第23页 |
| 3．3．1．1 愈伤组织诱导中的选择压力比较 | 第23页 |
| 3．3．1．2 生根过程中选择压力的比较 | 第23页 |
| 3．3．2 根癌农杆菌介导的遗传转化 | 第23-24页 |
| 3．3．2．1 预培养时间的比较 | 第23页 |
| 3．3．2．2 农杆菌浓度对转化的影响 | 第23页 |
| 3．3．2．3 共培养时间的比较 | 第23-24页 |
| 3．3．3 PCR检测 | 第24-25页 |
| 3．3．3．1 提取愈伤组织的DNA | 第24页 |
| 3．3．3．2 PCR扩增 | 第24-25页 |
| 4 结果与分析 | 第25-33页 |
| 4．1 克隆质粒pLR56的酶切鉴定 | 第25页 |
| 4．2 重组质粒pROKⅡ56的构建 | 第25-26页 |
| 4．2．1 严谨型大质粒pROKⅡ的提取 | 第25页 |
| 4．2．2 质粒的酶切与连接 | 第25-26页 |
| 4．2．3 重组质粒pROKⅡ56的鉴定 | 第26页 |
| 4．2．3．1 转化子的快速鉴定 | 第26页 |
| 4．2．3．2 重组质粒的酶切鉴定 | 第26页 |
| 4．2．3．3 PCR检测 | 第26页 |
| 4．3 根癌农杆菌的电泳检测和PCR检测 | 第26-28页 |
| 4．4 再生系统的研究 | 第28-30页 |
| 4．4．1 NAA浓度对愈伤组织诱导率的影响 | 第28-29页 |
| 4．4．2 不同品种外植体的成愈率（％） | 第29页 |
| 4．4．3 不同品种外植体的芽诱导率比较 | 第29页 |
| 4．4．4 不同分化培养基芽诱导率的比较 | 第29-30页 |
| 4．5 选择压力的确定 | 第30页 |
| 4．5．1 愈伤组织诱导中选择压力的确定 | 第30页 |
| 4．5．2 生根过程中选择压力的确定 | 第30页 |
| 4．6 根癌农杆菌介导的马铃薯转化系统的优化 | 第30-33页 |
| 4．6．1 预培养时间的确定 | 第30-31页 |
| 4．6．2 农杆菌浓度对转化的影响 | 第31-32页 |
| 4．6．3 共培养时间对转化的影响 | 第32页 |
| 4．6．4 抗性愈伤组织的PCR检测 | 第32-33页 |
| 5 讨 论 | 第33-35页 |
| 5．1 56KD蛋白基因及3'端非编码区的抗病机制 | 第33页 |
| 5．2 改善大分子质粒DNA重组效率 | 第33页 |
| 5．3 马铃薯遗传转化中外植体的选择 | 第33-35页 |
| 6 结 论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-40页 |
| 致 谢 | 第40-43页 |
| 图 版 | 第43页 |