缩略词表 | 第1-7页 |
中文摘要 | 第7-8页 |
英文摘要 | 第8-10页 |
前言 | 第10-12页 |
实验研究 | 第12-30页 |
1. 材料与方法 | 第12-22页 |
1.1 材料 | 第12-14页 |
1.1.1 实验动物 | 第12页 |
1.1.2 试剂 | 第12页 |
1.1.3 合成的引物序列 | 第12-13页 |
1.1.4 实验仪器 | 第13-14页 |
1.2 方法 | 第14-22页 |
1.2.1 动物模型的建立 | 第14页 |
1.2.1.1 动物分组 | 第14页 |
1.2.1.2 动物造模 | 第14页 |
1.2.2 建模前后总cDNA的制备 | 第14-17页 |
1.2.2.1 采血 | 第15页 |
1.2.2.2 RNA的提取 | 第15页 |
1.2.2.3 SMART技术合成cDNA | 第15-16页 |
1.2.2.4 PCR产物的纯化 | 第16页 |
1.2.2.5 cDNA的检测 | 第16-17页 |
1.2.3 抑制消减杂交 | 第17-19页 |
1.2.3.1 杂交前总cDNA的处理 | 第17-18页 |
1.2.3.2 消减杂交 | 第18-19页 |
1.2.3.3 Nested PCR扩增消减杂交产物 | 第19页 |
1.2.4 SSH 产物的进一步分离与回收 | 第19-22页 |
1.2.4.1 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离SSH产物 | 第19-20页 |
1.2.4.2 从聚丙烯酰胺凝胶中回收cDNA | 第20-21页 |
1.2.4.3 回收后cDNA的扩增、纯化、定量 | 第21-22页 |
2. 结果 | 第22-30页 |
2.1 动物模型的建立 | 第22页 |
2.2 RNA质量检测及cDNA合成 | 第22-25页 |
2.2.1 RT-PCR检测RNA质量 | 第22-24页 |
2.2.2 SMART技术合成cDNA | 第24-25页 |
2.3 cDNA纯化效率检测 | 第25-26页 |
2.4 酶切效果检测 | 第26页 |
2.5 Adaptor连接效率检测 | 第26-27页 |
2.6 SSH产物检测 | 第27-28页 |
2.6.1 琼脂糖凝胶电泳检测SSH产物 | 第27-28页 |
2.6.2 PAGE检测SSH产物 | 第28页 |
2.7 SSH产物的分离回收 | 第28-30页 |
讨论 | 第30-46页 |
1. 肾虚证造模方法与“恐伤肾”法造模的理论依据 | 第30-39页 |
1.1 肾虚证动物模型研究 | 第30-32页 |
1.1.1 研究现状 | 第30-31页 |
1.1.1.1 肾阳虚证动物模型 | 第30-31页 |
1.1.1.2 先天肾虚证动物模型 | 第31页 |
1.1.2 本实验造模方法的特点 | 第31-32页 |
1.2 “恐伤肾”法造模的理论依据 | 第32-39页 |
1.2.1 肾的主要生理功能 | 第32-34页 |
1.2.2 “恐伤肾” 的中医理论依据 | 第34页 |
1.2.3 “恐伤肾”与应激反应 | 第34-39页 |
1.2.3.1 应激时的全身反应综合征 | 第34-35页 |
1.2.3.2 应激时的神经内分泌反应 | 第35-36页 |
1.2.3.3 应激时的功能代谢变化 | 第36-37页 |
1.2.3.4 惊恐应激引起的基因表达的变化 | 第37-38页 |
1.2.3.5 糖皮质激素作用原理与应激反应 | 第38-39页 |
2. SMART cDNA 合成技术 | 第39-41页 |
3. 抑制消减杂交(SSH)技术 | 第41-46页 |
3.1 SSH的技术基础 | 第41-42页 |
3.2 SSH流程及原理要点 | 第42-44页 |
3.3 SSH的优点 | 第44-45页 |
3.4 注意事项 | 第45-46页 |
结语 | 第46-47页 |
问题与讨论 | 第47-48页 |
致谢 | 第48-49页 |
参考文献 | 第49-55页 |
综述:现代分子生物学技术在中医药学中的应用 | 第55-63页 |
参考文献 | 第63-65页 |