| 致谢 | 第1-5页 |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-30页 |
| 1.稻瘟病概述 | 第11-13页 |
| ·稻瘟病及病原菌 | 第11页 |
| ·稻瘟病的发病规律 | 第11-12页 |
| ·稻瘟病菌的侵染过程 | 第12-13页 |
| 2.稻瘟菌致病相关基因的研究进展 | 第13-23页 |
| ·产孢相关基因 | 第13-14页 |
| ·附着孢发育相关基因 | 第14-19页 |
| ·界面硬度和疏水性影响附着胞的分化 | 第14-15页 |
| ·分生孢子分泌疏水蛋白识别胞外信号 | 第15-16页 |
| ·细胞质膜跨膜蛋白识别和传递胞外信号至胞内 | 第16页 |
| ·附着胞黑色素层的沉积为巨大膨压的形成提供前提 | 第16-17页 |
| ·分生孢子特异性内含物降解为膨压提供物质基础 | 第17-18页 |
| ·附着胞细胞骨架重建和侵入栓的形成为附着胞侵入指明方向 | 第18-19页 |
| ·与致病相关的胞内信号传导途径 | 第19-23页 |
| ·cAMP途径 | 第19-20页 |
| ·G蛋白途径 | 第20-21页 |
| ·MAP kinase途径 | 第21-23页 |
| ·Ca~(2+)离子途径 | 第23页 |
| 3.农杆菌介导的稻瘟病菌T-DNA转化和插入突变研究 | 第23-26页 |
| ·丝状真菌遗传转化的研究进展 | 第24页 |
| ·农杆菌介导的T-DNA转化研究 | 第24-25页 |
| ·T-DNA插入突变的优势分析 | 第25-26页 |
| 4.扩增侧翼序列技术的研究 | 第26-29页 |
| ·反向PCR(Inverse PCR,IPCR) | 第26-27页 |
| ·TAIL-PCR(Thermal Asmmetric Interlaced PCR) | 第27-28页 |
| ·外源接头PCR | 第28-29页 |
| 5.本研究的目的意义 | 第29-30页 |
| 第二章 材料与方法 | 第30-45页 |
| 1.材料 | 第30-33页 |
| ·实验菌株、质粒载体及水稻、大麦致病性测定品种 | 第30页 |
| ·实验菌株 | 第30页 |
| ·质粒载体 | 第30页 |
| ·水稻、大麦致病性测定品种 | 第30页 |
| ·各类培养基、抗生素及工具酶 | 第30-33页 |
| ·培养基 | 第30-32页 |
| ·各类抗生素 | 第32-33页 |
| ·工具酶 | 第33页 |
| ·各类生化试剂、溶液及试剂盒 | 第33页 |
| 2 稻瘟病菌生物学性状测定试验 | 第33-36页 |
| ·菌落生长速度及菌落特性 | 第33-34页 |
| ·稻瘟病菌产孢培养和产孢量 | 第34页 |
| ·附着胞形成实验 | 第34页 |
| ·稻瘟菌有性生殖实验 | 第34-35页 |
| ·稻瘟菌单孢分离实验 | 第35页 |
| ·大麦和水稻离体接种 | 第35页 |
| ·洋葱表皮穿透实验 | 第35-36页 |
| ·稻瘟病菌菌丝、分生孢子和附着孢的GFP观察 | 第36页 |
| 3 各类PCR反应 | 第36-38页 |
| ·常规PCR反应体系 | 第36页 |
| ·细菌菌落PCR反应体系 | 第36-37页 |
| ·高效TAIL-PCR(hiTAIL-PCR)反应体系及反应程序 | 第37-38页 |
| 4.质粒DNA、基因组DNA及小片段DNA相关操作 | 第38-40页 |
| ·质粒DNA提取(CTAB法) | 第38-39页 |
| ·基因组DNA抽提 | 第39页 |
| ·DNA酶切 | 第39-40页 |
| ·胶回收(Axyprep DNA gel extraction kit回收法) | 第40页 |
| ·酶切DNA片段的去磷酸化(60μl反应体系) | 第40页 |
| ·连接反应 | 第40页 |
| 5.细菌和真菌转化 | 第40-45页 |
| ·农杆菌AGL-1电感受态制备及PATMT1质粒电转化 | 第41页 |
| ·农杆菌介导的T-DNA转化 | 第41-42页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备及细菌转化 | 第42-43页 |
| ·稻瘟菌原生质体制备与转化 | 第43-45页 |
| 第三章 结果与分析 | 第45-59页 |
| 1.致病缺陷突变体Ly-130的获得 | 第45-46页 |
| ·农杆菌介导的稻瘟菌T-DNA转化 | 第45页 |
| ·转化子致病性筛选和突变体Ly-130的获得 | 第45页 |
| ·突变体Ly-130遗传稳定性检测 | 第45-46页 |
| 2.MgPRG1基因的分离与同源性分析 | 第46-51页 |
| ·MgPRG1基因的分离 | 第46-47页 |
| ·MgPRG1基因的克隆、测序 | 第47-48页 |
| ·MgPRG1基因的获得与序列分析 | 第48页 |
| ·MgPRG1基因同源性分析 | 第48-51页 |
| 3.突变体Ly-130性状互补转化 | 第51-52页 |
| ·互补载体的构建 | 第51页 |
| ·互补转化 | 第51-52页 |
| 4 MgPRG1基因功能初步分析 | 第52-59页 |
| ·致病性分析 | 第52-53页 |
| ·菌落形态和生长速度分析 | 第53-54页 |
| ·分生孢子和附着孢形成观察 | 第54-57页 |
| ·有性生殖实验 | 第57页 |
| ·MgPRG1基因表达和定位分析 | 第57-59页 |
| 第四章 全文总结及后续研究 | 第59-61页 |
| 1.全文总结 | 第59页 |
| 2.存在的问题和后续的研究 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附表 | 第66页 |
