| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 英文缩略语表 | 第9-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 第一章 文献回顾 | 第12-22页 |
| 1 HCV研究进展 | 第12-17页 |
| ·丙型肝炎的流行现状 | 第12页 |
| ·丙型肝炎病毒的一般特征 | 第12页 |
| ·丙型肝炎病毒的基因结构与编码产物 | 第12-14页 |
| ·HCV蛋白质的加工及其功能 | 第14页 |
| ·HCV诊断检测的各种技术 | 第14-17页 |
| 2 HCV的基因分型及方法 | 第17-18页 |
| ·HCV的基因分型 | 第17页 |
| ·HCV不同基因型的世界分布 | 第17页 |
| ·我国不同基因型的HCV分布情况 | 第17-18页 |
| ·HCV基因分型的方法 | 第18页 |
| 3 HCV NS5A的研究进展 | 第18-20页 |
| ·NS5A在HCV临床检测中的价值 | 第18页 |
| ·NS5A蛋白磷酸化作用 | 第18页 |
| ·NS5A在干扰素治疗HCV中的意义 | 第18-19页 |
| ·NS5A对细胞周期的调节 | 第19页 |
| ·NS5A在信号转导中的作用 | 第19页 |
| ·NSSA其他生物学功能 | 第19-20页 |
| 4 HCV NS3功能及研究进展 | 第20-22页 |
| ·NS3在HCV临床检测中的功能 | 第20页 |
| ·NS3蛋白酶的功能及其与NS4A的相互作用 | 第20页 |
| ·NS3的三磷酸核苷酶和螺旋酶的结构和功能 | 第20页 |
| ·NS3在NS5A磷酸化中的作用 | 第20-22页 |
| 第二章 丙型肝炎病毒NS5A不同免疫源区的表达及检测评估 | 第22-44页 |
| 1 材料与仪器 | 第22-25页 |
| ·菌株和载体 | 第22-23页 |
| ·工具酶及试剂 | 第23页 |
| ·主要溶液配方 | 第23-24页 |
| ·培养基 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| 2 实验方法 | 第25-32页 |
| ·NS5AL、NS5AS的PCR扩增 | 第25-26页 |
| ·载体pET-NS5AL、pET-NS5AS的构建 | 第26-28页 |
| ·pET-NS5AL、pET-NS5AS的酶切鉴定及测序 | 第28页 |
| ·Rosetta(DE3)pLysS-NS5AL和BL21(DE3)-NS5AS的构建 | 第28-29页 |
| ·重组蛋白NS5AL、NS5AS的诱导表达 | 第29页 |
| ·诱导表达产物的SDS-PAGE分析 | 第29页 |
| ·诱导表达产物的Western-blot鉴定 | 第29-30页 |
| ·诱导表达时间的优化 | 第30页 |
| ·诱导表达产物的可溶性分析 | 第30页 |
| ·大量诱导并纯化重组蛋白 | 第30-31页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度 | 第31页 |
| ·ELISA鉴定并比较抗原检测活性 | 第31-32页 |
| 3 实验结果 | 第32-40页 |
| ·NS5AL、NS5AS的PCR扩增结果 | 第32页 |
| ·pET-NS5AL、pET-NS5AS酶切鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·pET-NS5AL、pET-NS5AS的测序结果 | 第33页 |
| ·重组蛋白的诱导表达结果 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白的Western-blot鉴定结果 | 第34-35页 |
| ·诱导表达时间优化结果 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白NS5AL和NS5AS的可溶性分析结果 | 第36页 |
| ·重组蛋白NS5AL和NS5AS的纯化结果 | 第36-37页 |
| ·Bradford法测定蛋白浓度结果 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白NS5AL、NS5AS的ELISA检测结果 | 第38-40页 |
| 4 讨论 | 第40-43页 |
| 小结一 | 第43-44页 |
| 第三章 丙型肝炎病毒NS3的表达及检测评估 | 第44-52页 |
| 1 材料 | 第44页 |
| ·菌种及载体 | 第44页 |
| ·各种仪器 | 第44页 |
| 2 实验方法 | 第44-46页 |
| ·BL21(DE3)-NS3的构建 | 第44页 |
| ·重组蛋白NS3的诱导表达及最佳诱导时间优化 | 第44页 |
| ·重组蛋白NS3的Western-Blot鉴定 | 第44-45页 |
| ·重组蛋白NS3的可溶性分析 | 第45页 |
| ·重组蛋白NS3的纯化 | 第45页 |
| ·Bradford法测定NS3浓度 | 第45页 |
| ·ELISA鉴定NS3检测效果 | 第45-46页 |
| 3 实验结果 | 第46-48页 |
| ·重组蛋白NS3的诱导表达及最佳诱导时间优化结果 | 第46页 |
| ·重组蛋白NS3的Western-Blot鉴定结果 | 第46-47页 |
| ·重组蛋白NS3的纯化结果 | 第47页 |
| ·Bradford测定重组蛋白NS3浓度结果 | 第47-48页 |
| ·ELISA鉴定NS3活性结果 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-50页 |
| 小结二 | 第50-52页 |
| 附录 | 第52-55页 |
| 参考文献 | 第55-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
