| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-54页 |
| 1 细菌细胞间通讯简述 | 第13-14页 |
| ·引言 | 第13页 |
| ·群体感应 | 第13-14页 |
| 2 革兰氏阴性菌的细菌群体感应系统 | 第14-21页 |
| ·LuxR/LuxI细菌群体感应系统的发现 | 第14-16页 |
| ·酰基高丝氨酸内酯(Acyl-HSL)的结构与生物合成 | 第16-18页 |
| ·LuxR类蛋白 | 第18-19页 |
| ·革兰氏阴性菌中的LuxR/LuxI家族 | 第19-20页 |
| ·革兰氏阴性细菌群体感应系统的调节机制 | 第20-21页 |
| 3 革兰氏阳性细菌的信号感应系统 | 第21-27页 |
| ·利用寡肽作为信号分子的群体感应系统 | 第21页 |
| ·二元(又称双组分)信号系统 | 第21-22页 |
| ·寡肽介导的信号感应系统 | 第22-27页 |
| ·金黄色葡萄球菌中的Agr群体感应系统 | 第23-24页 |
| ·Agr系统的寡肽信号分子的合成、加工与识别 | 第24-25页 |
| ·Agr信号感应系统的调控 | 第25-27页 |
| 4 种间信号感应系统 | 第27-35页 |
| ·二型自诱导物(autoinducer 2,AI-2)简述 | 第27页 |
| ·AI-2的合成途径及化学结构 | 第27-29页 |
| ·AI-2的信号传导途径 | 第29-31页 |
| ·AI-2影响靶基因表达 | 第31-35页 |
| 5 金黄色葡萄球菌概述 | 第35-52页 |
| ·金黄色葡萄球菌和生物膜 | 第36页 |
| ·细菌生物膜的组成 | 第36-38页 |
| ·细菌生物膜的形成机制 | 第38-40页 |
| ·菌体的黏附 | 第38-39页 |
| ·生物膜的发育 | 第39页 |
| ·生物膜的成熟 | 第39-40页 |
| ·金黄色葡萄球菌生物膜的组成及影响因素 | 第40-42页 |
| ·金黄色葡萄球菌的耐药性 | 第42-49页 |
| ·金黄色葡萄球菌的耐药性发展简述 | 第42-43页 |
| ·MRSA耐药性研究进展 | 第43页 |
| ·万古霉素耐药金葡菌研究进展 | 第43-47页 |
| ·金黄色葡萄球菌VraSR双组分信号系统 | 第47-49页 |
| ·金黄色葡萄球菌的细胞分裂与自溶素 | 第49-52页 |
| ·细胞分裂与自溶简述 | 第49-50页 |
| ·自溶相关的调控系统 | 第50-52页 |
| 6 本课题的研究目的 | 第52-54页 |
| 第二章 大肠杆菌的LuxS/AI-2系统的调控模式研究 | 第54-79页 |
| 引言 | 第54-57页 |
| 实验材料与方法 | 第57-66页 |
| 1 实验材料 | 第57-60页 |
| ·实验菌株及载体 | 第57-58页 |
| ·实验所用引物 | 第58-59页 |
| ·实验所用试剂 | 第59页 |
| ·培养基 | 第59-60页 |
| ·主要仪器及材料 | 第60页 |
| 2 实验方法 | 第60-66页 |
| ·大肠杆菌化转感受态的制备 | 第60-61页 |
| ·大肠杆菌化学转化 | 第61页 |
| ·质粒构建 | 第61-62页 |
| ·LsrR与LsrK表达质粒的构建 | 第61-62页 |
| ·启动子区域突变质粒的构建 | 第62页 |
| ·LsrR和LsrK蛋白的表达和纯化 | 第62-63页 |
| ·凝胶阻滞实验 | 第63-64页 |
| ·DNaseI足迹实验 | 第64页 |
| ·AI-2的体外磷酸化 | 第64-65页 |
| ·β-半乳糖苷酶实验 | 第65-66页 |
| 实验结果 | 第66-76页 |
| 1 LsrR蛋白与lsrA和lsrR启动子区域的结合 | 第66-67页 |
| 2 磷酸化AI-2在体外抑制LsrR和启动子区域的结合 | 第67-69页 |
| 3 LsrR与lsrR和lsrA启动子区域的精确结合位点 | 第69-72页 |
| 4 LsrR与lsrR和lsrA启动子区域结合位点的序列分析 | 第72-76页 |
| 结果讨论 | 第76-79页 |
| 第三章 金黄色葡萄球菌中LuxS/AI-2系统的功能研究 | 第79-107页 |
| 引言 | 第79-82页 |
| 实验材料与方法 | 第82-91页 |
| 1 实验材料 | 第82-86页 |
| ·实验菌株及载体 | 第82页 |
| ·实验所用引物 | 第82-83页 |
| ·实验所用试剂 | 第83-84页 |
| ·培养基 | 第84-85页 |
| ·主要仪器及材料 | 第85-86页 |
| 2 实验方法 | 第86-91页 |
| ·金黄色葡萄球菌电转感受态的制备 | 第86页 |
| ·金黄色葡萄球菌电转 | 第86页 |
| ·金黄色葡萄球菌基因组DNA的提取 | 第86-87页 |
| ·luxS敲除质粒的构建 | 第87页 |
| ·luxS突变株的构建 | 第87-88页 |
| ·luxS互补菌株的构建 | 第88页 |
| ·AI-2活性测定 | 第88页 |
| ·抗生素敏感性测定 | 第88-89页 |
| ·96孔板生物膜实验 | 第89页 |
| ·自溶实验 | 第89页 |
| ·金黄色葡萄球菌RNA抽提 | 第89-90页 |
| ·RNA反转录实验 | 第90页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第90-91页 |
| 结果与分析 | 第91-105页 |
| 1 金黄色葡萄球菌luxS基因的AI-2合成功能的验证 | 第91页 |
| 2 生物芯片法寻找LuxS的下游调控靶基因(转录组水平研究) | 第91-100页 |
| 3 luxS敲除株生物膜形成能力增强、自溶能力减弱 | 第100-102页 |
| 4 LuxS影响一系列荚膜多糖合成的转录水平 | 第102-103页 |
| 5 luxS敲除株对细胞壁合成抑制剂类抗生素敏感性减弱 | 第103-105页 |
| 讨论 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-127页 |
| 致谢 | 第127-128页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第128页 |
