| 摘要 | 第1-13页 |
| Abstract | 第13-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-32页 |
| 1 昆虫的嗅觉 | 第17-27页 |
| ·昆虫的嗅觉感器 | 第17-18页 |
| ·昆虫嗅觉相关蛋白 | 第18-22页 |
| ·气味结合蛋白OBPs | 第18-20页 |
| ·化学感受蛋白CSPs | 第20页 |
| ·气味受体ORs | 第20-21页 |
| ·气味降解酶ODEs | 第21-22页 |
| ·气味分子在昆虫体内的运输机制 | 第22-25页 |
| ·气味结合蛋白对气味分子的探测与结合 | 第22页 |
| ·气味分子在体内的运输 | 第22-24页 |
| ·气味分子与气味受体的结合 | 第24页 |
| ·气味分子的失活 | 第24-25页 |
| ·电化学信号传导 | 第25-27页 |
| 2 多胺 | 第27-31页 |
| ·多胺与昆虫的关系 | 第27-31页 |
| ·多胺在昆虫体内的存在 | 第28页 |
| ·多胺与昆虫卵黄发生 | 第28-29页 |
| ·多胺与昆虫胚胎发育 | 第29页 |
| ·多胺与昆虫生长和变态 | 第29页 |
| ·多胺与昆虫行为 | 第29-30页 |
| ·多胺与昆虫激素 | 第30-31页 |
| 课题研究目的意义 | 第31页 |
| 课题的创新之处 | 第31-32页 |
| 第二章 小菜蛾嗅觉相关蛋白基因的克隆、表达和序列分析 | 第32-70页 |
| 第一节 小菜蛾普通气味结合蛋白基因的克隆、表达和序列分析 | 第32-46页 |
| 1 材料和方法 | 第33-36页 |
| ·供试昆虫 | 第33页 |
| ·RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第33页 |
| ·引物设计 | 第33-35页 |
| ·兼并PCR克隆GOBP1和GOBP2片段 | 第35页 |
| ·3′和5′RACE克隆小菜蛾GOBP1和GOBP2全长基因 | 第35页 |
| ·GOBP1和GOBP2的组织分布 | 第35页 |
| ·定量PCR检测GOBP1和GOBP2时空表达 | 第35-36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-42页 |
| ·小菜蛾GOBP1和GOBP2基因的分子克隆和cDNA的序列分析 | 第36-38页 |
| ·小菜蛾GOBP1基因的克隆 | 第36页 |
| ·小菜蛾GOBP2基因的克隆 | 第36-38页 |
| ·Pxy1GOBP1和Pxy1GOBP2的组织分布 | 第38页 |
| ·基于Real-time PCR的Pxy1GOBP1和Pxy1GOBP2的时空表达 | 第38-42页 |
| 3 讨论 | 第42-46页 |
| 第二节 小菜蛾性信息素结合蛋白基因的克隆、表达和序列分析 | 第46-59页 |
| 1 材料和方法 | 第47-49页 |
| ·供试昆虫 | 第47页 |
| ·RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第47页 |
| ·引物设计 | 第47页 |
| ·兼并PCR克隆PBP1片段 | 第47页 |
| ·3′和5′RACE克隆小菜蛾PBP1全长基因 | 第47-48页 |
| ·PBP1的组织分布 | 第48页 |
| ·定量PCR检测PBP1时空表达 | 第48-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-57页 |
| ·小菜蛾PBP1基因的分子克隆和cDNA的序列分析 | 第49-53页 |
| ·Pxy1PBP1的组织分布 | 第53页 |
| ·基于Real-time PCR的Pxy1PBP1的时空表达 | 第53-57页 |
| 3 讨论 | 第57-59页 |
| 第三节 小菜蛾化学感受蛋白基因Pxy1CSP1的克隆和表达 | 第59-70页 |
| 1 材料和方法 | 第60-62页 |
| ·供试昆虫 | 第60页 |
| ·RNA的提取和cDNA第一链的合成 | 第60页 |
| ·引物设计 | 第60页 |
| ·兼并PCR克隆CSP1片段 | 第60页 |
| ·3′和5′RACE克隆小菜蛾CSP1全长基因 | 第60-61页 |
| ·CSP1的组织分布 | 第61页 |
| ·定量PCR检测CSP1时空表达 | 第61-62页 |
| 2 结果与分析 | 第62-68页 |
| ·小菜蛾CSP1基因的分子克隆和cDNA的序列分析 | 第62-64页 |
| ·Pxy1CSP1的组织分布 | 第64页 |
| ·基于Real-time PCR的Pxy1CSP1的时空表达 | 第64-68页 |
| 3 讨论 | 第68-70页 |
| 第三章 多胺和多胺抑制剂对小菜蛾嗅觉相关蛋白基因表达的影响 | 第70-90页 |
| 1 材料与方法 | 第71-73页 |
| ·试虫 | 第71-72页 |
| ·试剂 | 第72页 |
| ·昆虫样品处理 | 第72页 |
| ·定量PCR | 第72-73页 |
| ·定量PCR检测小菜蛾嗅觉相关基因的时空表达 | 第73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-88页 |
| ·小菜蛾嗅觉相关基因Real-time PCR的标准曲线 | 第73页 |
| ·多胺和DFMO对小菜蛾触角Pxy1GOBP1表达的影响 | 第73-78页 |
| ·多胺和DFMO对小菜蛾触角GOBP2表达的影响 | 第78-82页 |
| ·多胺和DFMO对小菜蛾触角CSP1表达的影响 | 第82-87页 |
| ·多胺和DFMO对小菜蛾触角PBP1表达的影响 | 第87-88页 |
| 3 讨论 | 第88-90页 |
| 第四章 小菜蛾嗅觉相关蛋白的原核表达纯化 | 第90-121页 |
| 第一节 小菜蛾Pxy1GOBP1和Pxy1GOBP2的原核表达纯化 | 第91-103页 |
| 1 材料和方法 | 第91-95页 |
| ·实验材料 | 第91页 |
| ·菌株和质粒 | 第91页 |
| ·酶及主要试剂 | 第91页 |
| ·构建原核表达载体pET-22b(+)-Pxy1GOBP1 | 第91-94页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第91-92页 |
| ·设计PCR引物 | 第92页 |
| ·酶切反应 | 第92-93页 |
| ·Pxy1GOBP1和Pxy1GOBP2目的片段与pET-22b(+)载体的酶切产物连接 | 第93页 |
| ·重组子鉴定 | 第93-94页 |
| ·质粒转化 | 第94页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第94页 |
| ·靶蛋白的大量表达 | 第94-95页 |
| ·包涵体蛋白的变性复性 | 第95页 |
| ·靶蛋白的纯化 | 第95页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第95页 |
| ·Pxy1GOBP1重组蛋白多克隆抗体的制备 | 第95页 |
| ·Western blot检测Pxy1GOBP1 | 第95页 |
| 2 结果和分析 | 第95-102页 |
| ·重组质粒的构建 | 第95-96页 |
| ·Pxy1GOBP1和Pxy1GOBP2功能基因的克隆 | 第96页 |
| ·重组质粒的构建 | 第96-97页 |
| ·pET-22b(+)-Pxy1GOBP1和pET-22b(+)-Pxy1GOBP2的表达 | 第97-99页 |
| ·pET-22b(+)-Pxy1GOBP1和pET-22b(+)-Pxy1GOBP2蛋白的纯化 | 第99页 |
| ·Pxy1GOBP1重组蛋白多克隆抗体的制备和纯化 | 第99-102页 |
| 3 讨论 | 第102-103页 |
| 第二节 小菜蛾Pxy1PBP1的原核表达纯化 | 第103-112页 |
| 1 材料和方法 | 第103-107页 |
| ·实验材料 | 第103页 |
| ·菌株和质粒 | 第103页 |
| ·酶及主要试剂 | 第103页 |
| ·构建原核表达载体pET-22b(+)-Pxy1PBP1 | 第103-105页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第103页 |
| ·设计PCR引物 | 第103-104页 |
| ·酶切反应 | 第104-105页 |
| ·Pxy1PBP1目的片段与pET-22b(+)载体的酶切产物连接 | 第105页 |
| ·重组子鉴定 | 第105页 |
| ·质粒转化 | 第105页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第105-106页 |
| ·靶蛋白的大量表达 | 第106页 |
| ·包涵体蛋白的变性复性 | 第106-107页 |
| ·靶蛋白的纯化 | 第107页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第107页 |
| ·Pxy1PBP1重组蛋白多克隆抗体的制备 | 第107页 |
| ·Western blot检测Pxy1PBP1 | 第107页 |
| 2 结果和分析 | 第107-111页 |
| ·重组质粒的构建 | 第107页 |
| ·Pxy1PBP1功能基因的克隆 | 第107页 |
| ·重组质粒的构建 | 第107-109页 |
| ·pET-22b(+)-Pxy1PBP1的表达 | 第109-111页 |
| ·pET-22b(+)-Pxy1PBP1的纯化 | 第111页 |
| ·Pxy1PBP1重组蛋白多克隆抗体的制备和纯化 | 第111页 |
| 3 讨论 | 第111-112页 |
| 第三节 小菜蛾Pxy1CSP1的原核表达纯化 | 第112-121页 |
| 1 材料和方法 | 第112-116页 |
| ·实验材料 | 第112页 |
| ·菌株和质粒 | 第112页 |
| ·酶及主要试剂 | 第112页 |
| ·构建原核表达载体pET-22b(+)-Pxy1CSP1 | 第112-115页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第112-113页 |
| ·设计PCR引物 | 第113页 |
| ·酶切反应 | 第113-114页 |
| ·Pxy1CSP1目的片段与pET-22b(+)载体的酶切产物连接 | 第114页 |
| ·重组子鉴定 | 第114-115页 |
| ·质粒转化 | 第115页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第115页 |
| ·靶蛋白的大量表达 | 第115-116页 |
| ·包涵体蛋白的变性复性 | 第116页 |
| ·靶蛋白的纯化 | 第116页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第116页 |
| 2 结果和分析 | 第116-120页 |
| ·重组质粒的构建 | 第116页 |
| ·Pxy1CSP1功能基因的克隆 | 第116页 |
| ·重组质粒的构建 | 第116-118页 |
| ·pET-22b(+)-Pxy1CSP1的表达 | 第118-120页 |
| ·pET-22b(+)-Pxy1CSP1的纯化 | 第120页 |
| 3 讨论 | 第120-121页 |
| 第五章 小菜蛾嗅觉感器的电镜观察 | 第121-131页 |
| 1 材料与方法 | 第122页 |
| ·实验昆虫 | 第122页 |
| ·实验方法 | 第122页 |
| 2 结果与分析 | 第122-129页 |
| ·触角的一般形态 | 第122-123页 |
| ·触角的超微结构 | 第123-129页 |
| ·毛形感器(sensilla trichodea,T) | 第123页 |
| ·锥形感器(sensilla basiconca,B) | 第123-124页 |
| ·棒形感器(sensilla rod-like,R) | 第124-125页 |
| ·鳞形感器(sensilla squamiformia,Sq) | 第125页 |
| ·腔锥形感器(Sensilla coeloconica,Co) | 第125-126页 |
| ·钟形感器(sensilla campullacea,C) | 第126-127页 |
| ·叉形感器(sensilla furcatea,Fu) | 第127页 |
| ·巨形感器(sensilla titanic,Ti) | 第127-128页 |
| ·栓锥形感器(sensilla styloconica,St) | 第128-129页 |
| ·端毛簇(Terminal hair,Th) | 第129页 |
| ·感觉孔 | 第129页 |
| 3 讨论 | 第129-131页 |
| 第六章 结论与展望 | 第131-133页 |
| 1 结论 | 第131-132页 |
| 2 展望 | 第132-133页 |
| 参考文献(References) | 第133-149页 |
| 博士期间发表论文情况 | 第149-150页 |
| 致谢 | 第150页 |
