| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-20页 |
| ·肉鸡胫骨软骨发育不良 | 第12-15页 |
| ·正常胫骨软骨发育 | 第12-13页 |
| ·胫骨软骨发育不良的特征 | 第13页 |
| ·胫骨软骨发育不良的原因 | 第13-14页 |
| ·胫骨软骨发育不良研究现状 | 第14-15页 |
| ·预防胫骨软骨发育不良的措施 | 第15页 |
| ·ChM-I(血管内皮细胞生长抑制因子) | 第15-17页 |
| ·VCAM-1(血管细胞粘附分子-1) | 第17页 |
| ·Realtime q-PCR原理 | 第17-18页 |
| ·原位杂交原理 | 第18-19页 |
| ·研究目的与意义 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-37页 |
| ·材料 | 第20-25页 |
| ·实验动物 | 第20页 |
| ·载体和细菌 | 第20页 |
| ·主要生物学试剂 | 第20-22页 |
| ·主要试剂及溶液的配制 | 第22-25页 |
| ·组织固定包埋使用试剂 | 第22页 |
| ·探针检测试剂配制 | 第22页 |
| ·原位杂交使用试剂 | 第22-23页 |
| ·抗生素类 | 第23页 |
| ·细菌培养基 | 第23-24页 |
| ·质粒抽提相关溶液 | 第24页 |
| ·SDS-PAGE相关溶液 | 第24页 |
| ·Western blot相关溶液 | 第24页 |
| ·表达提取纯化表达蛋白的相关溶液 | 第24-25页 |
| ·免疫组化试剂配制 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-37页 |
| ·动物实验 | 第25-26页 |
| ·动物模型建立 | 第25页 |
| ·组织的取样和保存 | 第25页 |
| ·组织包埋 | 第25-26页 |
| ·Realtime q-PCR | 第26-28页 |
| ·RNA提取 | 第26页 |
| ·引物的设计与合成 | 第26页 |
| ·RT-PCR和realtime q-PCR扩增 | 第26-28页 |
| ·原核表达体系构建 | 第28-32页 |
| ·ChM-I基因引物设计和PCR扩增 | 第28页 |
| ·PCR扩增片段的回收及与PGEM-T easy载体的连接 | 第28-29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29页 |
| ·质粒大量的制备(碱裂解法) | 第29-30页 |
| ·重组克隆载体的鉴定与序列分析 | 第30页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第30页 |
| ·表达产物的鉴定 | 第30-32页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第32页 |
| ·原位杂交方法 | 第32-35页 |
| ·ChM-I和VCAM-1基因的探针引物设计 | 第32页 |
| ·质粒的线性化 | 第32页 |
| ·DIG-Labeling cRNA探针合成 | 第32-33页 |
| ·cRNA探针浓度检测 | 第33-34页 |
| ·原位杂交步骤 | 第34-35页 |
| ·免疫组化 | 第35-37页 |
| ·多抗的制备和纯化(盐析法) | 第35-36页 |
| ·免疫组化步骤 | 第36-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-54页 |
| ·不同阶段肉鸡胫骨生长板发育特征 | 第37-39页 |
| ·Realtime q-PCR结果 | 第39-40页 |
| ·组织总RNA提取结果 | 第39页 |
| ·ChM-I和VCAM-1基因的RT-PCR结果 | 第39-40页 |
| ·ChM-I和VCAM-1基因的realtime q-PCR | 第40页 |
| ·原位杂交结果 | 第40-48页 |
| ·重组克隆质粒鉴定 | 第40-42页 |
| ·ChM-I-T和VCAM-1-T质粒线性化 | 第42-43页 |
| ·ChM-I和VCAM-1探针合成及浓度检测结果 | 第43-44页 |
| ·ChM-I基因原位杂交结果 | 第44-46页 |
| ·VCAM-1基因原位杂交结果 | 第46-48页 |
| ·ChM-I表达载体的构建结果 | 第48-50页 |
| ·ChM-I表达载体鉴定 | 第48-49页 |
| ·重组菌菌体裂解物的SDS-PAGE电泳结果 | 第49-50页 |
| ·表达产物的SDS-PAGE和Western-blot结果 | 第50页 |
| ·蛋白浓度的测定 | 第50页 |
| ·ChM-I免疫组化结果 | 第50-54页 |
| 4 讨论 | 第54-60页 |
| ·Realtime q-PCR和原位杂交 | 第54-57页 |
| ·肉鸡胫骨软骨RNA的提取与ChM-I、VCAM-1基因的扩增 | 第54页 |
| ·ChM-I和VCAM-1基因的克隆 | 第54页 |
| ·ChM-I realtime q-PCR和原位杂交 | 第54-55页 |
| ·VCAM-1 realtime q-PCR和原位杂交 | 第55页 |
| ·Realtime q-PCR的影响因素 | 第55页 |
| ·原位杂交方法的影响因素 | 第55-57页 |
| ·ChM-I原核表达载体的构建 | 第57-58页 |
| ·ChM-I的表达、提取和纯化 | 第57页 |
| ·包涵体的提取及溶解复性 | 第57-58页 |
| ·ChM-I免疫组化 | 第58-60页 |
| ·血清IgG的分离制备 | 第58页 |
| ·ChM-I免疫组化 | 第58-60页 |
| 总结 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-69页 |
| 基金项目 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
