| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩略词表(ABBREVIATIONS) | 第11-12页 |
| 第一章 论文综述与研究意义 | 第12-22页 |
| 1 研究的目的和意义 | 第12-14页 |
| ·研究意义 | 第12页 |
| ·研究目的 | 第12-13页 |
| ·技术路线 | 第13-14页 |
| 2 文献综述 | 第14-22页 |
| ·植物抗寒研究进展 | 第14-19页 |
| ·活性氧与植物抗寒 | 第14-15页 |
| ·Ca~(2+)与植物抗寒 | 第15-16页 |
| ·细胞膜系统与植物抗寒 | 第16页 |
| ·CBF基因与植物抗寒 | 第16-19页 |
| ·GFP在植物分子生物学领域的应用 | 第19-22页 |
| ·GFP的优点 | 第19-20页 |
| ·GFP的应用 | 第20-22页 |
| 第二章 CBF-GFP融合基因的亚细胞定位 | 第22-26页 |
| 1 材料与试剂 | 第22-23页 |
| ·转化受体材料 | 第22页 |
| ·供试农杆菌菌株和质粒 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22-23页 |
| 2 方法 | 第23-24页 |
| ·洋葱表皮细胞的培养 | 第23页 |
| ·质粒提取(碱裂解法) | 第23-24页 |
| ·金粉准备 | 第24页 |
| ·微弹制备 | 第24页 |
| ·基因枪的准备 | 第24页 |
| ·基因枪的轰击 | 第24页 |
| ·洋葱表皮镜检 | 第24页 |
| 3 结果与分析 | 第24-25页 |
| 4 讨论 | 第25-26页 |
| 第三章 枳、椪柑的遗传转化 | 第26-41页 |
| 1 材料与试剂 | 第26-27页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌株与质粒 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·培养基 | 第26-27页 |
| 2 方法 | 第27-31页 |
| ·根癌农杆菌介导的枳、椪柑遗传转化的实验 | 第27-29页 |
| ·枳、椪柑转化材料的准备 | 第27页 |
| ·农杆菌侵染菌液的制备 | 第27-28页 |
| ·枳、椪柑上胚轴预培养 | 第28页 |
| ·侵染与共培养 | 第28页 |
| ·筛选培养、再生 | 第28页 |
| ·嫁接及移栽 | 第28-29页 |
| ·枳再生苗的扩繁 | 第29页 |
| ·转基因植株的验证 | 第29-31页 |
| ·转基因植株基因组总DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·转基因植株的PCR检测 | 第30-31页 |
| 3 结果与分析 | 第31-37页 |
| ·枳遗传转化过程 | 第31-34页 |
| ·枳不定芽的产生及统计分析 | 第31-32页 |
| ·枳不定根生成的分析 | 第32-33页 |
| ·枳再生苗的生成 | 第33-34页 |
| ·椪柑的遗传转化过程 | 第34-35页 |
| ·椪柑不定芽的产生及分析 | 第34页 |
| ·椪柑不定根生成的分析 | 第34-35页 |
| ·枳再生苗扩繁的分析 | 第35页 |
| ·枳试管苗上胚轴与枳再生苗上胚轴新芽诱导的比较分析 | 第35-36页 |
| ·转基因材料的鉴定 | 第36-37页 |
| ·转基因植株基因组DNA的质量检测 | 第36页 |
| ·转基因植株PCR鉴定 | 第36-37页 |
| 4 问题与讨论 | 第37-41页 |
| ·枳、椪柑遗传转化过程中存在的问题 | 第37-39页 |
| ·农杆菌的污染及其控制 | 第37-38页 |
| ·逃逸现象的产生及其控制 | 第38-39页 |
| ·柑橘转基因材料获得的难题 | 第39页 |
| ·遗传转化受体材料的选择 | 第39-40页 |
| ·转基因植株的扩繁 | 第40-41页 |
| 第四章 CBF在枳和椪柑中的时空表达 | 第41-47页 |
| 1 材料 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41页 |
| 3 转基因植株的CBF时空表达结果与分析 | 第41-42页 |
| ·CBF在转基因枳中的时空表达 | 第41-42页 |
| ·CBF在转基因椪柑中的时空表达 | 第42页 |
| ·荧光显微镜下非转基因枳的发光情况 | 第42页 |
| 4 问题与讨论 | 第42-47页 |
| ·CBF在转基因枳中的时空表达 | 第42-45页 |
| ·CBF在转基因椪柑中的时空表达 | 第45页 |
| ·GFP检测的优越性 | 第45页 |
| ·GFP检测存在的问题 | 第45-46页 |
| ·下一步可以开展的工作 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-55页 |
| 附录 | 第55-75页 |
| 附录一 CBF-GFP融合基因的亚细胞定位 | 第56-57页 |
| 附录二 枳遗传转化 | 第57-59页 |
| 附录三 椪柑遗传转化 | 第59-60页 |
| 附录四 再生枳的扩繁 | 第60-61页 |
| 附录五 CBF在转基因枳中的时空表达 | 第61-69页 |
| 附录六 CBF在转基因椪柑中的时空表达 | 第69-74页 |
| 附录七 荧光显微镜下非转基因枳的发光情况 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |