| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 中英文缩略词表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-25页 |
| 1.1 毛囊的再生 | 第10-12页 |
| 1.1.1 毛囊的组成结构 | 第11-12页 |
| 1.1.2 毛囊的周期性生长 | 第12页 |
| 1.2 毛囊干细胞 | 第12-16页 |
| 1.2.1 毛囊干细胞的特点 | 第12-13页 |
| 1.2.2 毛囊干细胞的标记物基因 | 第13-15页 |
| 1.2.3 毛囊干细胞参与毛囊再生过程 | 第15页 |
| 1.2.4 毛囊干细胞的分子调控机制 | 第15-16页 |
| 1.3 毛囊干细胞的微环境(Niche) | 第16-19页 |
| 1.3.1 Niche中的真皮细胞 | 第16-17页 |
| 1.3.2 Niche中的干细胞子代细胞 | 第17-18页 |
| 1.3.3 Niche中的神经细胞 | 第18页 |
| 1.3.4 Niche中的血管 | 第18页 |
| 1.3.5 Niche中的立毛肌细胞 | 第18页 |
| 1.3.6 Niche中的黑色素细胞 | 第18-19页 |
| 1.4 Wnt/β-catenin信号通路 | 第19-22页 |
| 1.4.1 Wnt/β-catenin信号的分子生物学机制 | 第19-20页 |
| 1.4.2 Wnt信号参与表皮器官发育过程 | 第20页 |
| 1.4.3 Wnt信号参与毛囊的发育过程 | 第20-22页 |
| 1.5 毛囊干细胞的建立过程 | 第22-24页 |
| 1.5.1 毛囊的形态发生 | 第22-23页 |
| 1.5.2 毛囊的形态发生过程中的信号调控 | 第23页 |
| 1.5.3 毛囊干细胞标记物早期的表达和功能 | 第23页 |
| 1.5.4 毛囊干细胞早期的建立 | 第23-24页 |
| 1.6 研究目的和意义 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第25页 |
| 2.1.1 野生型小鼠材料 | 第25页 |
| 2.1.2 转基因小鼠材料 | 第25页 |
| 2.2 常规试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.1 PCR相关试剂 | 第25页 |
| 2.2.2 RNA提取相关试剂 | 第25页 |
| 2.2.3 反转录与定量PCR相关试剂 | 第25-26页 |
| 2.2.4 免疫组织化学实验相关试剂 | 第26页 |
| 2.2.5 小鼠实验相关试剂 | 第26页 |
| 2.2.6 流式细胞分选相关试剂 | 第26页 |
| 2.2.7 其它相关试剂 | 第26页 |
| 2.3 实验抗体 | 第26-27页 |
| 2.3.1 实验所用一抗 | 第26页 |
| 2.3.2 实验所用二抗 | 第26-27页 |
| 2.4 相关试剂配制 | 第27-28页 |
| 2.4.1 PBS缓冲液 | 第27页 |
| 2.4.2 4%多聚甲醛 | 第27页 |
| 2.4.3 EDTA的配制(20 mM,pH 8.0) | 第27页 |
| 2.4.4 DAPI染液 | 第27页 |
| 2.4.5 他莫昔芬的配制(10 mg/mL) | 第27页 |
| 2.4.6 封闭液的配制 | 第27页 |
| 2.4.7 苏木精染液的配制 | 第27-28页 |
| 2.4.8 伊红染液的配制 | 第28页 |
| 2.4.9 油红O染液的配制 | 第28页 |
| 2.4.10 4%中性缓冲液福尔马林缓冲液的配制 | 第28页 |
| 2.4.11 麻醉剂的配制 | 第28页 |
| 2.5 主要仪器设备 | 第28-30页 |
| 2.5.1 显微镜 | 第28-29页 |
| 2.5.2 组织学实验相关仪器 | 第29页 |
| 2.5.3 流式细胞分选相关仪器 | 第29页 |
| 2.5.4 分子生物学相关仪器 | 第29-30页 |
| 2.5.5 其它仪器 | 第30页 |
| 2.6 分析软件 | 第30页 |
| 2.7 实验方法 | 第30-42页 |
| 2.7.1 谱系追踪实验 | 第30-31页 |
| 2.7.2 小鼠皮肤双光子活体成像实验 | 第31页 |
| 2.7.3 小鼠皮肤双光子激光灼杀实验 | 第31-32页 |
| 2.7.4 流式细胞仪分选高位毛栓细胞 | 第32页 |
| 2.7.5 流式细胞仪分选低位毛栓细胞 | 第32页 |
| 2.7.6 流式细胞仪分选成年小鼠毛囊干细胞 | 第32-33页 |
| 2.7.7 细胞RNA提取实验 | 第33页 |
| 2.7.8 反转录 | 第33-34页 |
| 2.7.9 荧光定量PCR | 第34页 |
| 2.7.10 条件性基因敲除小鼠的杂交和给药处理 | 第34-35页 |
| 2.7.11 制作小鼠皮肤组织石蜡切片 | 第35页 |
| 2.7.12 石蜡切片HE染色 | 第35-36页 |
| 2.7.13 石蜡切片的免疫组织化学染色 | 第36-37页 |
| 2.7.14 小鼠皮肤组织冰冻切片的免疫荧光染色 | 第37页 |
| 2.7.15 小鼠皮肤表皮全组织HE和Oil Red O染色 | 第37-38页 |
| 2.7.16 小鼠皮肤表皮全组织的免疫荧光染色 | 第38页 |
| 2.7.17 RNAscope原位杂交实验 | 第38-40页 |
| 2.7.18 图像的拍摄及处理 | 第40页 |
| 2.7.19 小鼠基因型鉴定实验 | 第40页 |
| 2.7.20 细胞基因组的提取实验 | 第40-42页 |
| 第三章 实验结果与分析 | 第42-69页 |
| 3.1 毛囊干细胞在胚胎期的起源 | 第42-51页 |
| 3.1.1 谱系追踪实验小鼠模型 | 第42-43页 |
| 3.1.2 小鼠背部和尾部皮肤毛囊发育模式特征 | 第43-47页 |
| 3.1.3 谱系追踪实验探索毛囊干细胞的起源 | 第47-51页 |
| 3.2 发育早期微环境影响毛囊干细胞的建立 | 第51-55页 |
| 3.2.1 高位毛栓细胞激光灼杀实验小鼠模型 | 第51-52页 |
| 3.2.2 激光灼杀实验能有效地杀死毛囊干细胞前体细胞 | 第52页 |
| 3.2.3 被激光灼杀的前体细胞被临近细胞取代形成新的干细胞 | 第52-53页 |
| 3.2.4 新形成的毛囊干细胞具有再生功能 | 第53-55页 |
| 3.3 高位和低位毛栓细胞的转录谱特征分析和验证 | 第55-61页 |
| 3.3.1 流式细胞分离技术分选高位和低位毛栓细胞 | 第55-56页 |
| 3.3.2 高通量RNA-seq分析两种毛栓细胞的转录谱特征 | 第56-57页 |
| 3.3.3 Real-time PCR验证Wnt/β-catenin信号在两种毛栓细胞中的表达差异 | 第57页 |
| 3.3.4 原位杂交实验验证Wnt/β-catenin信号在两种毛栓细胞中的表达和响应差异 | 第57-58页 |
| 3.3.5 Top-Gal转基因小鼠检测Wnt/β-catenin信号在毛囊发育早期细胞中的响应 | 第58页 |
| 3.3.6 谱系追踪实验探索响应Wnt/β-catenin信号的细胞命运 | 第58-59页 |
| 3.3.7 Shh/Gli1信号在毛栓细胞中的响应情况 | 第59-60页 |
| 3.3.8 BMP/Id2信号在毛栓细胞中的响应情况 | 第60-61页 |
| 3.4 Wnt/β-catenin信号对毛囊干细胞建立的影响 | 第61-69页 |
| 3.4.1 激活Wnt/β-catenin信号的小鼠模型 | 第61页 |
| 3.4.2 高位细胞中的Wnt/β-catenin信号激活影响毛囊干细胞的建立 | 第61-63页 |
| 3.4.3 Wnt/β-catenin信号激活对Sox9蛋白的表达情况的影响 | 第63-66页 |
| 3.4.4 Wnt/β-catenin信号对Sox9的抑制作用 | 第66-67页 |
| 3.4.5 发育早期Wnt/β-catenin信号的激活影响毛囊干细胞的长期自我更新 | 第67-69页 |
| 第四章 讨论 | 第69-72页 |
| 4.1 毛囊干细胞在胚胎期的起源 | 第69-70页 |
| 4.2 Wnt/β-catenin信号在毛囊干细胞建立过程中的动态变化 | 第70页 |
| 4.3 毛囊干细胞建立的分子调控机制 | 第70-71页 |
| 4.4 毛栓期Wnt/β-catenin信号隔离区的建立机制 | 第71-72页 |
| 第五章 结论 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 致谢 | 第79-81页 |
| 附录 实验用抗体列表和引物列表 | 第81-84页 |
| 作者简历 | 第84-85页 |
