| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-12页 |
| 文献综述 | 第12-23页 |
| 1 水稻条纹病毒的生物学特性 | 第12-17页 |
| ·水稻条纹叶枯病的分布与危害 | 第12页 |
| ·水稻条纹叶枯病的症状 | 第12页 |
| ·水稻条纹叶枯病的病原、寄主及传毒介体 | 第12-13页 |
| ·水稻条纹病毒的基因组结构 | 第13页 |
| ·水稻条纹病毒编码的蛋白及其功能 | 第13-15页 |
| ·水稻条纹病毒的变异 | 第15-17页 |
| 2 RNA 沉默 | 第17-23页 |
| ·RNA 沉默简介 | 第17页 |
| ·RNA 沉默的机制 | 第17-18页 |
| ·RNA 沉默抑制子 | 第18-23页 |
| ·沉默抑制子的发现和种类 | 第18-20页 |
| ·沉默抑制子的鉴定方法 | 第20-21页 |
| ·农杆菌介导的瞬时表达系统鉴定抑制子 | 第20页 |
| ·利用病毒载体表达法鉴定抑制子 | 第20页 |
| ·转基因植物杂交和嫁接鉴定抑制子 | 第20-21页 |
| ·沉默抑制子抑制基因沉默的机制 | 第21页 |
| ·沉默抑制子的生物技术应用 | 第21-23页 |
| ·提高外源蛋白的表达水平 | 第21-22页 |
| ·解析RNA 沉默过程 | 第22-23页 |
| 引言 | 第23-25页 |
| 材料与方法 | 第25-41页 |
| 1 供试材料 | 第25-26页 |
| ·病样来源 | 第25-26页 |
| ·植物材料 | 第26页 |
| ·菌种和载体 | 第26页 |
| ·酶和化学试剂 | 第26页 |
| ·常用缓冲溶液和培养基 | 第26页 |
| ·抗生素 | 第26页 |
| ·仪器设备 | 第26页 |
| 2 试验方法 | 第26-41页 |
| ·叶片总RNA 的提取 | 第26-27页 |
| ·提RNA 的准备工作 | 第26-27页 |
| ·Trizol 抽提液提取总RNA 方法 | 第27页 |
| ·cDNA 的合成 | 第27-28页 |
| ·PCR 技术 | 第28页 |
| ·PCR 产物的克隆 | 第28-32页 |
| ·PCR 产物回收和纯化 | 第28-29页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第29页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| ·Ecoli DH5α感受态细胞的少量制备（CaCl_2 法） | 第29-30页 |
| ·农杆菌感受态细胞的少量制备 | 第30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第30页 |
| ·连接产物转化农杆菌（冻融法） | 第30页 |
| ·阳性克隆的PCR 鉴定 | 第30-31页 |
| ·质粒提取 | 第31-32页 |
| ·克隆基因的测序、分析和登录 | 第32页 |
| ·RSV CP 基因和NS3 基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·CP 基因的克隆 | 第32页 |
| ·CP 基因的引物设计 | 第32页 |
| ·cDNA 合成及外壳蛋白（CP）基因的RT-PCR 扩增 | 第32页 |
| ·NS3 基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·NS3 基因的引物设计 | 第32-33页 |
| ·NS3 基因的PCR 扩增 | 第33页 |
| ·克隆基因的序列分析 | 第33-36页 |
| ·NS3 基因植物表达载体的构建 | 第36-39页 |
| ·用于局部沉默的NS3 基因植物表达载体的构建策略（图） | 第36-37页 |
| ·用于回复试验的NS3 基因植物表达载体的构建策略（图） | 第37页 |
| ·NS3 片段的引物设计 | 第37-38页 |
| ·NS3 片段的克隆 | 第38页 |
| ·NS3 植物表达载体的构建 | 第38页 |
| ·重组植物表达载体转入农杆菌 | 第38-39页 |
| ·农杆菌共浸润接种 | 第39页 |
| ·系统沉默试验 | 第39-40页 |
| ·回复试验 | 第40页 |
| ·GFP 荧光观察和拍照 | 第40-41页 |
| 结果与分析 | 第41-51页 |
| 1 RSV CP 基因和NS3 基因的克隆 | 第41-43页 |
| ·RSV CP 基因的克隆 | 第41-42页 |
| ·cDNA 合成及外壳蛋白（CP）基因的RT-PCR 扩增 | 第41页 |
| ·RSV CP 基因的克隆 | 第41-42页 |
| ·RSV NS3 基因的克隆 | 第42-43页 |
| ·cDNA 合成及NS3 基因的RT-PCR 扩增 | 第42-43页 |
| ·RSV NS3 基因的克隆 | 第43页 |
| 2 RSV CP 基因和NS3 基因的序列分析 | 第43-47页 |
| ·CP 基因的相似性分析 | 第43-45页 |
| ·NS3 基因的相似性分析 | 第45-47页 |
| 3 NS3 基因植物表达载体的构建 | 第47-49页 |
| ·用于局部沉默的NS3 基因植物表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·用于局部沉默的NS3 基因片段的克隆 | 第47页 |
| ·pBin-NS3 植物表达载体的构建 | 第47-48页 |
| ·用于回复试验的NS3 基因植物表达载体的构建 | 第48-49页 |
| ·用于回复试验的NS3 基因片段的克隆 | 第48-49页 |
| ·TRV-NS3 植物表达载体的构建 | 第49页 |
| 4 RSV 马鞍山分离物编码的NS3 能抑制GFP 16c 本氏烟的局部沉默 | 第49-50页 |
| 5 RSV 安徽马鞍山分离物编码的NS3 蛋白的回复试验 | 第50-51页 |
| 讨论 | 第51-54页 |
| 1 RSV CP 基因和NS3 基因的序列分析 | 第51-52页 |
| 2 RSV 安徽马鞍山分离物编码的NS3 基因功能鉴定 | 第52-54页 |
| 结论 | 第54-55页 |
| 附：草莓镶脉病毒（SVBV）外壳蛋白的原核表达及抗血清制备 | 第55-61页 |
| 1 材料与方法 | 第55-57页 |
| ·酶及生化试剂 | 第55-56页 |
| ·质粒载体及菌株 | 第56页 |
| ·引物的设计与合成 | 第56页 |
| ·SVBV 外壳蛋白基因的克隆 | 第56页 |
| ·原核表达质粒的构建 | 第56页 |
| ·CP 在pET-32a 表达系统中的表达与纯化 | 第56页 |
| ·重组蛋白的多抗血清的制备 | 第56-57页 |
| 2 结果与分析 | 第57-60页 |
| ·SVBV 外壳蛋白CP 基因的克隆和原核表达质粒的构建 | 第57页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第57-58页 |
| ·重组蛋白的表达、纯化、SDS-PAGE 及Western-blot 分析 | 第58-59页 |
| ·抗血清制备及效价测定 | 第59-60页 |
| 3 讨论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录A：常用缓冲液及培养基配方法 | 第68-73页 |
| 附录B：常用的抗生素和激素及使用浓度 | 第73-74页 |
| 附录C：常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第74-76页 |
| 附录D：本文所用的重要缩写词及中文对照 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 作者简介 | 第78页 |
