| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 文献综述 | 第10-20页 |
| 1 黄瓜花叶病毒（CMV）和马铃薯Y 病毒（PVY）的研究现状 | 第10-15页 |
| ·黄瓜花叶病毒的生物学特性与基因组结构特征 | 第10-12页 |
| ·黄瓜花叶病毒的生物学特性 | 第10-11页 |
| ·黄瓜花叶病毒基因组的结构与功能 | 第11-12页 |
| ·CMV 2b 基因的功能研究 | 第12页 |
| ·马铃薯Y 病毒的生物学特性与基因组结构特征 | 第12-14页 |
| ·马铃薯Y 病毒的生物学特性 | 第12-13页 |
| ·马铃薯Y 病毒的基因组结构与功能 | 第13-14页 |
| ·PVY Hc-pro 基因的功能研究 | 第14页 |
| ·植物抗CMV 和PVY 转基因工程研究进展 | 第14-15页 |
| ·CMV 转基因抗病毒基因工程研究 | 第14-15页 |
| ·PVY 转基因抗病毒基因工程研究 | 第15页 |
| 2 植物病毒与RNA 沉默 | 第15-20页 |
| ·RNA 沉默的机制 | 第15-17页 |
| ·RNA 沉默与植物抗病毒特性 | 第17页 |
| ·植物病毒对RNA 沉默的抑制 | 第17-18页 |
| ·RNA 沉默的植物病毒抑制子 | 第18页 |
| ·构建反向重复产生dsRNA 可以介导高效基因沉默 | 第18-20页 |
| 引言 | 第20-22页 |
| 材料与方法 | 第22-34页 |
| 1 供试材料 | 第22页 |
| ·病样采集 | 第22页 |
| ·植物材料 | 第22页 |
| ·病毒毒源 | 第22页 |
| ·菌种和载体 | 第22页 |
| ·酶和化学试剂 | 第22页 |
| ·常用缓冲溶液和培养基 | 第22页 |
| ·抗生素 | 第22页 |
| ·仪器设备 | 第22页 |
| 2 试验方法 | 第22-34页 |
| ·植物病毒的ELISA 检测 | 第22-23页 |
| ·DNA 分子操作常用方法 | 第23-27页 |
| ·CTAB 法抽提总DNA | 第23-24页 |
| ·叶片总RNA 的提取 | 第24页 |
| ·DNase 消化处理 | 第24-25页 |
| ·cDNA 的合成 | 第25页 |
| ·PCR 技术 | 第25-26页 |
| ·RT-PCR 扩增技术 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物的克隆和序列分析 | 第27-29页 |
| ·PCR 产物回收和纯化 | 第27页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第27页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第27-28页 |
| ·连接产物的转化 | 第28页 |
| ·重组质粒的筛选 | 第28-29页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第29页 |
| ·克隆基因的序列测定、分析和登录 | 第29页 |
| ·CMV RNA2 部分片段的获得 | 第29-30页 |
| ·CMV RNA2 部分片段引物的设计与合成 | 第29页 |
| ·cDNA 的合成及CMV RNA2 部分片段的的克隆 | 第29-30页 |
| ·序列测定和序列分析 | 第30页 |
| ·反向重复植物表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·CMV 2b 基因正、反向片段的获得 | 第30页 |
| ·CMV 2b 基因反向重复植物表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·融合CMV 2b 和HC-Pro 两个反向重复植物表达载体的构建 | 第32页 |
| ·反向重复植物表达载体导入农杆菌（液氮冻融法） | 第32页 |
| ·烟草转化及卡那霉素抗性植株的再生 | 第32-33页 |
| ·转基因烟草阳性植株的检测 | 第33页 |
| ·转基因烟草植株T_0 代的抗病性鉴定 | 第33-34页 |
| 结果与分析 | 第34-45页 |
| 1 病毒的ELISA 检测结果 | 第34页 |
| 2 CMV RNA2 部分片段的克隆、测序和序列分析 | 第34-35页 |
| ·CMV RNA2 部分片段的克隆和测序 | 第34页 |
| ·不同来源CMV 2b基因的序列比较及分子进化分析 | 第34-35页 |
| 3 反向重复植物表达载体的构建 | 第35-38页 |
| ·CMV 2b基因正、反向片段的克隆 | 第35-36页 |
| ·CMV 2b反向重复植物表达载体的构建 | 第36-37页 |
| ·融合CMV 2b和HC-Pro 两个反向重复植物表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 4 烟草的转化和卡那抗性植株的获得 | 第38-40页 |
| 5 转基因烟草阳性植株的检测 | 第40-41页 |
| 6 转基因烟草植株T_0 代的抗病性鉴定 | 第41-45页 |
| 讨论 | 第45-47页 |
| 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 附录A：常用缓冲液及培养基配方法 | 第55-59页 |
| 附录B：常用的抗生素和激素及使用浓度 | 第59-60页 |
| 附录C：常用化学试剂、分子生物学试剂及仪器 | 第60-62页 |
| 附录D：本文所用的重要缩写词及中文对照 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64页 |
| [附]在读期间发表论文 | 第64页 |
