| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-11页 |
| 缩写符号 | 第11-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-47页 |
| ·AGPs的分子模型及结构特点 | 第18-22页 |
| ·AGPs生理生化特性及其常用的细胞学研究方法 | 第22-25页 |
| ·AGPs生物学功能的研究进展 | 第25-34页 |
| ·花粉发育过程及成熟花粉结构特点 | 第34-39页 |
| ·花粉发育相关研究的进展 | 第39-45页 |
| ·小结 | 第45-47页 |
| 第二章 拟南芥AtFLA3生物信息学分析 | 第47-67页 |
| ·前言 | 第47-50页 |
| ·材料和方法 | 第50-52页 |
| ·实验材料 | 第50页 |
| ·生物信息学相关网站及软件 | 第50页 |
| ·实验对象 | 第50页 |
| ·实验方法 | 第50-52页 |
| ·序列比对及系统进化树的绘制 | 第50-51页 |
| ·MPSS和microarray数据分析 | 第51页 |
| ·氨基酸序列信息分析 | 第51页 |
| ·N-信号肽预测 | 第51页 |
| ·GPI加锚信号预测 | 第51-52页 |
| ·启动子顺式调控元件预测 | 第52页 |
| ·蛋白亚定位预测 | 第52页 |
| ·结果 | 第52-66页 |
| ·AGPs基因序列比对、进化树绘制及亲缘关系的分析 | 第52-56页 |
| ·拟南芥AGPs基因的基因芯片及MPSS数据分析 | 第56-61页 |
| ·AtFLA3核酸及氨基酸序列信息分析 | 第61-62页 |
| ·AtFLA3的N-信号肽预测 | 第62-63页 |
| ·AtFLA3的GPI加锚信号预测 | 第63-64页 |
| ·AtFLA3启动子顺式调控元件预测 | 第64-65页 |
| ·AtFLA3的亚细胞定位预测 | 第65-66页 |
| ·讨论 | 第66-67页 |
| 第三章 拟南芥AtFLA3的表达分析 | 第67-95页 |
| ·前言 | 第67-73页 |
| ·材料与方法 | 第73-90页 |
| ·实验材料 | 第73-76页 |
| ·植物材料 | 第73页 |
| ·菌株和载体 | 第73页 |
| ·化学试剂和溶液 | 第73-76页 |
| ·实验方法 | 第76-90页 |
| ·各种外源因子处理花序的方法 | 第76-77页 |
| ·半定量及定量PCR | 第77-82页 |
| ·总RNA(ribonucleic acid)抽提 | 第77-79页 |
| ·RNA的反转录 | 第79-80页 |
| ·引物设计 | 第80页 |
| ·半定量及定量PCR反应 | 第80-82页 |
| ·启动子与GUS融合表达载体的遗传转化 | 第82-89页 |
| ·生物信息学预测启动子序列及顺式调控元件分析 | 第83页 |
| ·基因组抽提及PCR扩增全长启动子序列 | 第83页 |
| ·启动子与GUS融合表达载体的构建 | 第83-84页 |
| ·CaCl_2法大肠杆菌感受态细胞制备及转化 | 第84-85页 |
| ·碱裂解法提取质粒 | 第85-86页 |
| ·质粒DNA的电泳、PCR和酶切检测及测序验证 | 第86页 |
| ·农杆菌菌株GV3101感受态制备、转化及PCR检测 | 第86-87页 |
| ·农杆菌介导的浸花法转化拟南芥植株 | 第87-88页 |
| ·拟南芥T_0代种子的抗性筛选与幼苗移栽 | 第88页 |
| ·拟南芥T_1代抗性植株的基因组水平鉴定 | 第88-89页 |
| ·拟南芥T_3代转基因纯合株系的获得 | 第89页 |
| ·GUS染色分析 | 第89页 |
| ·GUS染色液及透明剂的配制 | 第89页 |
| ·树脂包埋与半薄切片 | 第89-90页 |
| ·结果 | 第90-93页 |
| ·AtFLA3在花器官中特异表达 | 第90-91页 |
| ·AtFLA3的表达受到光的调控 | 第91页 |
| ·pAtFLA3::GUS转基因株系的GUS表达 | 第91-93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| 第四章 AtFLA3亚细胞定位研究 | 第95-106页 |
| ·前言 | 第95-98页 |
| ·材料与方法 | 第98-101页 |
| ·实验材料 | 第98页 |
| ·植物材料 | 第98页 |
| ·菌株和载体 | 第98页 |
| ·主要试剂 | 第98页 |
| ·主要培养基及配方 | 第98页 |
| ·实验方法 | 第98-101页 |
| ·亚细胞定位载体的构建 | 第98-100页 |
| ·N 端信号肽及GPI加锚信号的预测 | 第98-99页 |
| ·引物设计 | 第99页 |
| ·重组载体构建及载体检测 | 第99-100页 |
| ·重组载体的遗传转化 | 第100页 |
| ·阳性纯合转基因株系的筛选及鉴定 | 第100页 |
| ·转基因植株下胚轴细胞的荧光检测 | 第100-101页 |
| ·结果 | 第101-103页 |
| ·eGFPm-AtFLA3及eGFPm-AtFLA3△GPI重组载体构建 | 第101-102页 |
| ·eGFPm-AtFLA3及eGFPm-AtFLA3△GPI转基因植株的基因组水平鉴定 | 第102-103页 |
| ·eGFPm-AtFLA3及eGFPm-AtFLA3△GPI在纯合转基因幼苗下胚轴细胞中的定位 | 第103页 |
| ·讨论 | 第103-106页 |
| ·生物信息学预测的准确性 | 第103页 |
| ·不同转化系统及优缺点 | 第103-104页 |
| ·使用eGFP定位蛋白的优缺点 | 第104页 |
| ·AGPs蛋白定位的相关研究 | 第104-105页 |
| ·AtFLA3亚细胞定位及GPI锚在蛋白定位中的作用 | 第105-106页 |
| 第五章 AtFLA3的生物学功能研究 | 第106-135页 |
| ·前言 | 第106-109页 |
| ·材料与方法 | 第109-123页 |
| ·实验材料 | 第109-111页 |
| ·植物材料 | 第109页 |
| ·菌株和载体 | 第109-110页 |
| ·主要试剂 | 第110页 |
| ·常用培养基和抗生素 | 第110-111页 |
| ·实验方法 | 第111-123页 |
| ·T-DNA突变体纯合鉴定及表型观察 | 第111-114页 |
| ·T-DNA纯合插入突变体鉴定引物的设计 | 第111页 |
| ·小量基因组的提取 | 第111页 |
| ·三引物法鉴定纯合突变体株系 | 第111-113页 |
| ·T-DNA纯合插入突变体RNA水平的鉴定 | 第113-114页 |
| ·T-DNA纯合插入突变体表型观察 | 第114页 |
| ·过量表达载体的构建 | 第114页 |
| ·利用RNA干扰技术研究基因的生物学功能 | 第114-123页 |
| ·RNAi载体的构建及遗传转化 | 第114-115页 |
| ·RNAi阳性转基因株系的筛选及鉴定 | 第115页 |
| ·RNAi转基因株系的表型观察及分析 | 第115-123页 |
| ·RNAi转基因株系形态观察 | 第115页 |
| ·成熟角果中可育胚珠数目统计方法 | 第115页 |
| ·花及花粉形态观察 | 第115-116页 |
| ·FDA(fluorescin diacetate)染色方法 | 第116页 |
| ·碘-碘化钾染色方法 | 第116页 |
| ·花粉体外萌发及萌发率统计方法 | 第116-117页 |
| ·杂交实验 | 第117页 |
| ·DAPI染色方法 | 第117-118页 |
| ·CW染色方法 | 第118页 |
| ·果胶单克隆抗体JIM5和JIM7的免疫荧光技术 | 第118-119页 |
| ·花粉管脱色苯胺蓝染色方法 | 第119页 |
| ·半薄切片和超薄切片方法 | 第119-120页 |
| ·上下游相关基因的PCR分析 | 第120-123页 |
| ·结果 | 第123-132页 |
| ·SALK_016582纯合插入突变体的鉴定及表型分析 | 第123页 |
| ·AtFLA3 RNAi载体构建,转基因株系的鉴定及表型分析 | 第123-130页 |
| ·RNAi载体的构建 | 第123-125页 |
| ·阳性转基因株系的鉴定 | 第125-127页 |
| ·RNAi植株的表型 | 第127页 |
| ·RNAi植株的花粉活力分析 | 第127页 |
| ·RNAi植株的花粉体外萌发及萌发率 | 第127页 |
| ·互交实验分析RNAi株系败育的原因 | 第127-128页 |
| ·花药半薄切片结构的观察 | 第128页 |
| ·花粉超微结构的观察 | 第128页 |
| ·花粉壁中纤维素及果胶定位 | 第128-129页 |
| ·上下游相关基因的表达分析 | 第129-130页 |
| ·AtFLA3过量表达载体的构建,转基因株系的鉴定 | 第130-132页 |
| ·讨论 | 第132-135页 |
| ·AtFLA3是拟南芥花粉内壁形成所必需 | 第132-134页 |
| ·AtFLA3可能受到一些花粉发育相关基因的调控 | 第134-135页 |
| 第六章 总讨论 | 第135-139页 |
| 参考文献 | 第139-162页 |
| 图版及图版说明 | 第162-181页 |
| 在读期间发表的论文 | 第181-182页 |
| 致谢 | 第182页 |
