花生种子全长cDNA文库序列分析及花生LEA基因家族的初步研究
| 中文摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 第一部分 文献综述 | 第13-32页 |
| 1. 植物功能基因组学 | 第13-23页 |
| ·功能基因组学概述 | 第13-15页 |
| ·花生功能基因组学研究概况 | 第15-16页 |
| ·植物功能基因组学研究技术简介 | 第16-19页 |
| ·EST技术原理与应用 | 第19-22页 |
| ·基因芯片的原理与应用 | 第22-23页 |
| 2 植物LEA蛋白 | 第23-30页 |
| ·植物LEA蛋白家族简介 | 第23-24页 |
| ·植物LEA蛋白分类、结构及功能 | 第24-30页 |
| 3 本论文研究的目的意义及主要内容 | 第30-32页 |
| 第二部分 实验部分 | 第32-114页 |
| 第一章 花生全长cDNA文库构建及序列分析 | 第32-69页 |
| 一、实验材料 | 第32-37页 |
| 二、实验方法 | 第37-46页 |
| 1 cDNA文库构建 | 第37-38页 |
| 2 大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第38页 |
| 3 质粒提取 | 第38-39页 |
| 4 质粒的双酶切 | 第39页 |
| 5 EST测序 | 第39-40页 |
| 6 EST数据分析 | 第40页 |
| 7 基因芯片制备 | 第40-42页 |
| 8 花生植物基因组DNA提取 | 第42页 |
| 9 花生总RNA提取 | 第42-43页 |
| 10 Trizol法提取总RNA | 第43-44页 |
| 11 总RNA纯化 | 第44页 |
| 12 花生总RNA反转录 | 第44-45页 |
| 13 半定量RT-PCR | 第45-46页 |
| 三、实验结果 | 第46-67页 |
| 1 文库容量及插入片段大小分析 | 第46-47页 |
| 2 花生ESTs测序及序列处理 | 第47页 |
| 3 花生EST分析 | 第47-61页 |
| ·EST的功能注释与分类 | 第47-53页 |
| ·花生LEC1基因的表达研究 | 第53-54页 |
| ·花生油体蛋白基因的克隆和分析 | 第54-60页 |
| ·花生脂质转运蛋白基因的克隆和表达 | 第60页 |
| ·花生NAC转录因子基因的克隆 | 第60-61页 |
| ·金属硫蛋白基因的克隆 | 第61页 |
| 4 基因芯片的制备 | 第61页 |
| 5 花生基因表达谱分析 | 第61-66页 |
| ·花生不同组织基因表达分析 | 第62-63页 |
| ·花生种子不同发育时期基因表达分析 | 第63-66页 |
| 6 部分基因的半定量RT-PCR验证 | 第66-67页 |
| 四、讨论 | 第67-69页 |
| 第二章 花生LE尤家族基因的克隆与表达分析 | 第69-93页 |
| 一、实验材料 | 第69-70页 |
| 二、实验方法 | 第70-72页 |
| 1 花生LEA家族基因序列分析 | 第70页 |
| 2 实验材料采集 | 第70-71页 |
| 3 花生总RNA的提取 | 第71-72页 |
| 4 半定量RT-PCR | 第72页 |
| 5 LEA蛋白亚细胞定位预测分析 | 第72页 |
| 三、实验结果 | 第72-92页 |
| 1 花生LEA家族基因克隆及分类 | 第72-75页 |
| 2 花生LEA蛋白序列分析 | 第75-85页 |
| 3 花生LEA基因表达分析 | 第85-90页 |
| ·花生种子不同发育时期形态 | 第85-86页 |
| ·花生总RNA的提取 | 第86页 |
| ·花生LEA基因在非种子组织中的表达 | 第86-87页 |
| ·花生LEA基因在种子不同发育时期的表达 | 第87-88页 |
| ·不同逆境条件对LEA基因表达的影响 | 第88-90页 |
| 4 花生LEA蛋白亚细胞定位预测 | 第90-92页 |
| 四 讨论 | 第92-93页 |
| 第三章 花生脱水素基因AhD劲W基因的初步研究 | 第93-114页 |
| 一、实验材料 | 第93-95页 |
| 二、实验方法 | 第95-104页 |
| 1 AhDHN1基因克隆 | 第96-97页 |
| 2 大肠杆菌化转感受态的制备 | 第97页 |
| 3 质粒提取 | 第97-98页 |
| 4 DNA胶回收 | 第98页 |
| 5 植物基因组DNA的提取 | 第98-99页 |
| 6 总RNA提取 | 第99-100页 |
| 7 Northern杂交 | 第100-101页 |
| 8 植物表达载体构建 | 第101页 |
| 9 农杆菌转化与鉴定 | 第101-102页 |
| 10 拟南芥和烟草的转化 | 第102-103页 |
| 11 原核表达 | 第103-104页 |
| 三、实验结果 | 第104-112页 |
| 1 AhDHN1基因克隆 | 第104-105页 |
| 2 AhDHN1同源性比较 | 第105-106页 |
| 3 AhDHN1的基因组序列 | 第106-108页 |
| 4 Northern杂交 | 第108-109页 |
| 5 植物表达载体的构建及农杆菌转化 | 第109-110页 |
| 6 拟南芥和烟草的转化 | 第110-111页 |
| 7 原核表达 | 第111-112页 |
| 四 讨论 | 第112-114页 |
| 附录 | 第114-148页 |
| 参考文献 | 第148-155页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第155页 |
| 参与的科研课题 | 第155-156页 |
| 致谢 | 第156页 |
