| 缩略词 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-23页 |
| 一、蛋白质乙酰化研究背景 | 第9-14页 |
| ·蛋白质的翻译后修饰 | 第9页 |
| ·蛋白质的乙酰化研究 | 第9-11页 |
| ·乙酰化修饰和蛋白质稳定性 | 第11-14页 |
| 二、分子伴侣介导的自噬研究背景 | 第14-22页 |
| ·自噬的分类 | 第14页 |
| ·分子伴侣介导的自噬的分子机制 | 第14-15页 |
| ·HSC70识别底物的基序 | 第15-16页 |
| ·分子伴侣复合物组成 | 第16页 |
| ·溶酶体内的hsc70 | 第16页 |
| ·溶酶体膜上的受体LAMP-2A | 第16-18页 |
| ·分子伴侣介导的自噬的新底物 | 第18-19页 |
| ·氧化压力下分子伴侣介导的自噬被激活 | 第19页 |
| ·分子伴侣介导的自噬的小分子抑制剂和激活剂 | 第19-20页 |
| ·LAMP-2A定位在溶酶体膜上 | 第20页 |
| ·巨自噬和分子伴侣介导的自噬的相互作用 | 第20页 |
| ·LAMP-2A蛋白量随年龄增大减少的机制 | 第20-22页 |
| 三、主要的研究内容、目的、意义及创新点 | 第22-23页 |
| 第二章 乙酰化促进丙酮酸激酶M2通过分子伴侣介导的自噬途径降解 | 第23-68页 |
| 一、PKM2研究背景 | 第23-24页 |
| 二、材料和方法 | 第24-39页 |
| ·乙酰化抗原的制备 | 第24页 |
| ·乙酰化抗体的鉴定 | 第24-25页 |
| ·LTQ-MSMS样品的制备 | 第25-26页 |
| ·质谱数据处理 | 第26-27页 |
| ·细胞的培养和转染 | 第27页 |
| ·抗体的制备 | 第27-28页 |
| ·从免疫血清纯化抗体 | 第28页 |
| ·葡萄糖浓度梯度处理 | 第28页 |
| ·免疫沉淀/免疫共沉淀 | 第28-30页 |
| ·HIS标签蛋白的表达和纯化 | 第30-31页 |
| ·定点突变实验 | 第31页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| ·免疫印迹 | 第32-33页 |
| ·PKM2的酶活测定 | 第33-34页 |
| ·PKM2 knockdown实验 | 第34页 |
| ·PKM2及其突变体Putback实验 | 第34-35页 |
| ·溶酶体纯化 | 第35-37页 |
| ·溶酶体结合和摄取实验 | 第37页 |
| ·测定细胞内的NAOpH | 第37-38页 |
| ·代谢物水平测定 | 第38-39页 |
| 三、试剂 | 第39-43页 |
| ·生化试剂 | 第39-41页 |
| ·免疫学相关试剂 | 第41-42页 |
| ·常用质粒 | 第42-43页 |
| 四、仪器设备 | 第43-44页 |
| 五、实验结果 | 第44-63页 |
| ·PKM2的K305位点是被乙酰化修饰的 | 第44-47页 |
| ·乙酰化位点对PKM2酶活的影响 | 第47-48页 |
| ·pCAF和PKM2在体内相互作用 | 第48页 |
| ·pCAF乙酰化PKM2的K305位点 | 第48页 |
| ·pCAF下调内源PKM2的蛋白量 | 第48-49页 |
| ·PKM2通过溶酶体途径降解 | 第49-51页 |
| ·PKM2通过分子伴侣介导的自噬途径降解 | 第51-52页 |
| ·PKM2的K305乙酰化可能促进其分子伴侣介导的自噬降解 | 第52-53页 |
| ·PKM2的K305乙酰化可以促进其分子伴侣介导的自噬降解 | 第53-55页 |
| ·NAM/TSA处理可促进PKM2在体外被溶酶体摄取 | 第55-56页 |
| ·PKM2的K305R突变体可抑制其通过分子伴侣介导的自噬途径降解 | 第56页 |
| ·确定PKM2中与HSC70结合的基序 | 第56-58页 |
| ·高葡萄糖浓度可促进PKM2的K305位点乙酰化 | 第58页 |
| ·高葡萄糖浓度可促进PKM2和HSC70的结合 | 第58-59页 |
| ·降低Lamp2A的蛋白量可以抑制高浓度葡萄糖导致的PKM2降解 | 第59页 |
| ·PKM2降解可导致糖酵解代谢中间产物积累 | 第59-61页 |
| ·PKM2降解可导致烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸产量增加 | 第61-62页 |
| ·Sirt1去乙酰化PKM2的K305位点的乙酰化 | 第62-63页 |
| 六、讨论 | 第63-67页 |
| 七、结论 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
