| 摘要 | 第7-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| Abbreviation | 第17-20页 |
| Chapter Ⅰ Optimization of callus induction and plant regeneration from different explants in sorghum(Sorghum bicolor) | 第20-68页 |
| 1.0 Introduction | 第20-24页 |
| 1.1 Transformation methods | 第24-28页 |
| 1.1.1 Micro projectile transformation | 第24-26页 |
| 1.1.2 Agrobacterium-mediated transformation | 第26-27页 |
| 1.1.3 Electroporation-mediated transformation | 第27页 |
| 1.1.4 Pollen-mediated transformation | 第27-28页 |
| 1.2 Factors influencing the sorghum transformation | 第28-45页 |
| 1.2.1 Genotypes | 第28-29页 |
| 1.2.2 Sources of explants | 第29-30页 |
| 1.2.3 Agrobacterium strains and vectors | 第30-31页 |
| 1.2.4 Marker selection | 第31-32页 |
| 1.2.5 Reporter genes | 第32-33页 |
| 1.2.6 Agrobacterium concentration | 第33-34页 |
| 1.2.7 In-vitro culture media | 第34-35页 |
| 1.2.8 Osmotic treatment | 第35-36页 |
| 1.2.9 Antioxidants | 第36页 |
| 1.2.10 Antibiotics | 第36-37页 |
| 1.2.11 Phenolic compounds | 第37-38页 |
| 1.2.12 Temperature | 第38-45页 |
| 1.3 Materials and Methods | 第45-48页 |
| 1.3.1 Plant materials | 第45页 |
| 1.3.2 Regeneration | 第45-46页 |
| 1.3.3 Agrobacterium strains and binary vectors | 第46页 |
| 1.3.4 Agrobacterium transformation | 第46-48页 |
| 1.4 Results | 第48-54页 |
| 1.4.1 Callus induction from immature embryos | 第48-49页 |
| 1.4.2 Callus induction from mature embryos | 第49-50页 |
| 1.4.3 Callus induction and regeneration from immature inflorescence | 第50-51页 |
| 1.4.4 Transformation through peircing of mature embryos | 第51-52页 |
| 1.4.5 Production of phenolic compounds | 第52-53页 |
| 1.4.6 Excessive growth of Agrobacterium during co-cultivation | 第53-54页 |
| 1.5 Discussion | 第54-58页 |
| 1.6 References | 第58-68页 |
| CHAPTER Ⅱ CRISPR/Cas9 and virus-induced gene silencing(VIGS)-mediated functional characterization of pectin and lignin related genes | 第68-152页 |
| 2.0 Introduction | 第68-70页 |
| 2.1 Lignins | 第70-76页 |
| 2.1.1 Structure and synthesis of lignin | 第70-73页 |
| 2.1.2 Monolignin biosynthesis | 第73-74页 |
| 2.1.3 Role of CCoAMT,COMT and CCRT in lignin synthesis | 第74-76页 |
| 2.2 Pectin | 第76-79页 |
| 2.2.1 Structure of homogalacturonan(HG) | 第76页 |
| 2.2.2 Structure of xylogalacturonan | 第76-77页 |
| 2.2.3 Structure of rhamnogalacturonan II | 第77-78页 |
| 2.2.4 Structure of rhamnogalacturonan I | 第78-79页 |
| 2.3 Synthesis of Monosaccharides | 第79-82页 |
| 2.3.1 Synthesis of UDP-D-glucose and UDP-D-galactose | 第79-80页 |
| 2.3.2 Synthesis of UDP-L-rhamnose | 第80页 |
| 2.3.3 Synthesis of UDP-D-glucuronic acid | 第80-81页 |
| 2.3.4 Synthesis of UDP-D-galacturonic acid,UDP-D-xylose and UDP-D-apiose | 第81页 |
| 2.3.5 Synthesis of UDP-L-arabinose | 第81页 |
| 2.3.6 Synthesis of GDP-D-mannose and GDP-L-fucose | 第81-82页 |
| 2.3.7 SYNTHESIS OF GDP-D-RHAMNOSE AND GDP-L-GALACTOSE | 第82页 |
| 2.4 UDP-D-glucuronic acid4-epimerase involved in synthesis of pectin | 第82-84页 |
| 2.5 GAlactUronosylTransferase(GAUT)involved in synthesis of pectin | 第84页 |
| 2.6 Role of homogalacturonan in biological processes | 第84-88页 |
| 2.6.1 Role of homogalacturonan in plant development | 第85页 |
| 2.6.2 HG modulation and its impact on the physical properties to the end-product | 第85-86页 |
| 2.6.3 Role of HG modifications in plant responses to biotic stress | 第86-87页 |
| 2.6.4 Roles of HG modulation in structural resistance to plants | 第87-88页 |
| 2.7 Virus-induced gene silencing for functional characterization | 第88-91页 |
| 2.8 CRISPR/Cas9 as a tool of genome editing | 第91-94页 |
| 2.8.1 CRISPR/Cas9 vectors for gene editing in plants | 第93-94页 |
| 2.9 Materials and Methods | 第94-109页 |
| 2.9.1 Plasmid construction for VIGS | 第94-95页 |
| 2.9.2 Phylogenetic analysis | 第95页 |
| 2.9.3 Gene structure analysis | 第95页 |
| 2.9.4 Statistical analysis | 第95页 |
| 2.9.5 Cell wall isolation and extraction | 第95-96页 |
| 2.9.6 Estimation of monosaccharaides | 第96页 |
| 2.9.7 Biphenyl assay | 第96页 |
| 2.9.8 RNA extraction protocol | 第96-98页 |
| 2.9.9 PCR product purification protocol | 第98-99页 |
| 2.9.10 Plasmid extraction | 第99-100页 |
| 2.9.11 DNA ligation | 第100页 |
| 2.9.12 E.coli transformation | 第100-101页 |
| 2.9.13 Analyzing positive clones | 第101-102页 |
| 2.9.14 Analyzing positive clones by restriction digestion | 第102页 |
| 2.9.15 Synthesis of cDNA | 第102-103页 |
| 2.9.16 Amplification of PCR product | 第103页 |
| 2.9.17 Vector digestion | 第103-104页 |
| 2.9.18 Agarose gel electrophoresis | 第104页 |
| 2.9.19 Semi-quantitative reverse transcriptase PCR(RT-PCR) | 第104-105页 |
| 2.9.20 GV3101 Electro-competent cells transformation | 第105页 |
| 2.9.21 Virus gene inducing(VIGs)protocol | 第105-106页 |
| 2.9.22 Agrobacterium-mediated leaf disc transformation | 第106-107页 |
| 2.9.23 Quantitative real-time PCR protocol | 第107-109页 |
| 2.10 Results | 第109-120页 |
| 2.10.1 The identification of NbGAE Gene family in tobacco | 第109-112页 |
| 2.10.2 Phylogenetic analysis of the NbGAE genes in tobacco and other species | 第112页 |
| 2.10.3 Gene Structure analysis of the NbGAE gene family in the tobacco | 第112-114页 |
| 2.10.4 Sequence alignments of NbGAE family | 第114页 |
| 2.10.5 Down regulation in expression of NbGAE6 homologous | 第114-117页 |
| 2.10.6 Estimation of GalA content through biphenyl assay | 第117-118页 |
| 2.10.7 Monosaccharide composition in silenced NbGAE6 | 第118-119页 |
| 2.10.8 Relative expression of NbGAE6 in tobacco after VIGS | 第119-120页 |
| 2.11 Results for CRISPR/Cas9 | 第120-130页 |
| 2.11.1 Vector and gene construction for CRISPR/Cas | 第121页 |
| 2.11.2 Identification of Protospacer Adjacent Motif(PAM)of pectin related genes | 第121-122页 |
| 2.11.3 Identification of Protospacer Adjacent Motif(PAM)of lignin related genes | 第122-123页 |
| 2.11.4 Phylogenetic analysis of CCoAMT | 第123-124页 |
| 2.11.5 Semi-quantitative(RT-PCR)analysis for CCoAMT | 第124-125页 |
| 2.11.6 Semi-quantitative(RT-PCR)analysis of NtabGAE6 and NtabGAE | 第125-126页 |
| 2.11.7 Establishment of optimized CRISPR/Cas9 system and mutation analysis | 第126-130页 |
| 2.12 Discussion | 第130-133页 |
| 2.13 Conclusion | 第133-138页 |
| 2.14 REFERENCES | 第138-152页 |
| CHAPTER Ⅲ Conclusion and recommendations | 第152-154页 |
| ACKNOWLEDGEMENT | 第154-155页 |
| CURRICULUM VITAE | 第155页 |
