| 摘要 | 第11-13页 |
| Abstract | 第13-14页 |
| 第一章 前言 | 第15-33页 |
| 1.1 蛋白酪氨酸磷酸酶 | 第15-18页 |
| 1.1.1 蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)概述 | 第15-16页 |
| 1.1.2 蛋白酪氨酸磷酸酶作为靶点的药物开发 | 第16-17页 |
| 1.1.3 Shp1简介 | 第17页 |
| 1.1.4 VHR简介 | 第17-18页 |
| 1.1.5 HePTP简介 | 第18页 |
| 1.2 Shp2简介 | 第18-28页 |
| 1.2.1 Shp2的蛋白结构 | 第18页 |
| 1.2.2 Shp2的PTP活性调节 | 第18-20页 |
| 1.2.3 Shp2参与调控的信号通路 | 第20-25页 |
| 1.2.4 Shp2的生理功能与突变导致的人类疾病 | 第25-27页 |
| 1.2.5 Shp2与癌症 | 第27-28页 |
| 1.3 Shp2抑制剂研究进展 | 第28-30页 |
| 1.3.1 化学合成药物与Shp2抑制剂 | 第29页 |
| 1.3.2 天然产物与Shp2抑制剂 | 第29-30页 |
| 1.4 天然产物概述 | 第30-31页 |
| 1.5 本课题的研究内容及意义 | 第31-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-48页 |
| 2.1 仪器和材料 | 第33-39页 |
| 2.1.1 质粒 | 第33页 |
| 2.1.2 菌种 | 第33页 |
| 2.1.3 主要细胞株 | 第33页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第33-36页 |
| 2.1.5 主要溶液及配制 | 第36-39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-48页 |
| 2.2.1 BL21 Star (DE3)感受态细胞的制备及质粒的转化 | 第39-40页 |
| 2.2.2 蛋白的原核表达及体外提取纯化 | 第40-41页 |
| 2.2.3 蛋白的纯度及活性检测 | 第41-42页 |
| 2.2.4 PTP-Shp2抑制剂高通量筛选模型的建立 | 第42-43页 |
| 2.2.5 Western Blot实验 | 第43-44页 |
| 2.2.6 乳腺癌细胞的培养 | 第44页 |
| 2.2.7 慢病毒过表达Shp2 Q79P核心质粒的构建 | 第44-45页 |
| 2.2.8 慢病毒质粒转化Stbl3感受态细胞 | 第45页 |
| 2.2.9 病毒包装 | 第45页 |
| 2.2.10 慢病毒浓缩 | 第45-46页 |
| 2.2.11 慢病毒感染MDA-MB-468细胞 | 第46页 |
| 2.2.12 Shp2 Q79P过表达稳转细胞系的筛选 | 第46页 |
| 2.2.13 Transwell实验 | 第46-48页 |
| 第三章 结果与分析 | 第48-64页 |
| 3.1 体外高通量筛选PTP-Shp2蛋白抑制剂模型的建立 | 第48-51页 |
| 3.1.1 体外成功表达和纯化PTP-Shp2、Shp1、VHR、HePTP蛋白 | 第48-49页 |
| 3.1.2 原核表达纯化的人重组PTP-Shp2蛋白具有蛋白酪氨酸磷酸酶活性 | 第49-50页 |
| 3.1.3 成功建立体外高通量筛选PTP-Shp2抑制剂模型 | 第50-51页 |
| 3.2 体外高通量筛选PTP-Shp2特异性抑制剂 | 第51-56页 |
| 3.2.1 金线莲、太子参、筋骨草、红菇内生菌活性成分对PTP-Shp2的抑制作用 | 第51-52页 |
| 3.2.2 30种中药粗馏分对PTP-Shp2的抑制作用 | 第52-54页 |
| 3.2.3 体外高通量筛选天然化合物库发现7种PTP-Shp2蛋白抑制剂 | 第54-55页 |
| 3.2.4 H320和H335选择性抑制PTP-Shp2 | 第55-56页 |
| 3.3 PTP-Shp2特异性抑制剂的功能研究 | 第56-64页 |
| 3.3.1 H320抑制EGF诱导下Shp2依赖的Erk的活化 | 第56-57页 |
| 3.3.2 H335抑制EGF诱导下Shp2依赖的Ek的活化 | 第57-58页 |
| 3.3.3 H335抑制Shp2 Q79P稳转MDA-MB-468细胞系中Ras/Erk信号通路的激活 | 第58-62页 |
| 3.3.4 H335减弱EGF诱导下MDA-MB-468的迁移能力 | 第62-64页 |
| 第四章 讨论 | 第64-67页 |
| 第五章 总结与展望 | 第67-68页 |
| 附录 H001-H349对PTP-Shp2的抑制率 | 第68-71页 |
| 参考文献 | 第71-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
