| 缩略语表 | 第7-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-15页 |
| 前言 | 第16-17页 |
| 文献回顾 | 第17-29页 |
| 第一部分 炎症性肠病 | 第17-20页 |
| 1.概述 | 第17页 |
| 2.影响IBD发病率的因素 | 第17-20页 |
| 2.1 遗传因素影响IBD的发生发展 | 第17-18页 |
| 2.2 环境暴露因素在IBD的发生发展中有重要作用 | 第18-19页 |
| 2.3 肠道微菌群与IBD的关系密切 | 第19页 |
| 2.4 卫生基础设施影响IBD的发病率 | 第19-20页 |
| 第二部分 O-GLCNAC糖基化修饰 | 第20-29页 |
| 1 概述 | 第20-21页 |
| 1.1 O-GlcNAc糖基化修饰是蛋白翻译后修饰的一种重要形式 | 第20页 |
| 1.2 O-GlcNAc糖基化修饰由唯一的一对酶OGT和OGA调控 | 第20-21页 |
| 2.O-GlcNAc的主要功能 | 第21-24页 |
| 2.1 O-GlcNAc参与转录调控 | 第21-22页 |
| 2.2 O-GlcNAc对表观遗传的调控 | 第22-23页 |
| 2.3 O-GlcNAc动态调控细胞信号传导 | 第23-24页 |
| 3.O-GlcNAc与炎症相关疾病 | 第24-27页 |
| 3.1 O-GlcNAc通过NFκB通路影响炎症 | 第25-26页 |
| 3.1.1 O-GlcNAc修饰增强NFκB的转录活性 | 第25-26页 |
| 3.1.2 O-GlcNAcylation参与NFκB活性的负调节剂 | 第26页 |
| 3.2 O-GlcNAc对免疫细胞的影响 | 第26-27页 |
| 4.OGA、OGT和O-GlcNAc在炎症性肠病中的作用和机制尚不明确 | 第27-29页 |
| 第一部分 人溃疡性结肠炎样本中OGA、OGT和O-GLCNAC蛋白表达水平观察 | 第29-39页 |
| 1 样本和材料 | 第29-31页 |
| 1.1 样本来源 | 第29页 |
| 1.2 主要试剂和药物 | 第29-30页 |
| 1.3 主要仪器和器材 | 第30-31页 |
| 2 方法 | 第31-36页 |
| 2.1 样本收集 | 第31-32页 |
| 2.1.1 病例选择 | 第31-32页 |
| 2.1.2 知情同意 | 第32页 |
| 2.1.3 样本采集与处理 | 第32页 |
| 2.2 UC组织蛋白印迹实验(Western Blot,WB) | 第32-34页 |
| 2.2.1 提取UC组织总蛋白 | 第32-33页 |
| 2.2.2 BCA法蛋白定量 | 第33页 |
| 2.2.3 蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第33-34页 |
| 2.3 免疫组织化学 | 第34页 |
| 2.4 实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR) | 第34-36页 |
| 2.4.1 组织RNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.4.2 RT-PCR | 第35-36页 |
| 2.4.3 qRT-PCR | 第36页 |
| 3 结果 | 第36-38页 |
| 3.1 UC组织蛋白印迹、免疫组化和mRNA水平实验结果 | 第36-38页 |
| 4.讨论 | 第38-39页 |
| 第二部分 构建OGA肠上皮特异敲除和过表达小鼠模型 | 第39-51页 |
| 1 材料 | 第39-40页 |
| 1.1 实验动物 | 第39-40页 |
| 1.1.1 小鼠来源 | 第39-40页 |
| 1.1.2 饲养条件 | 第40页 |
| 1.2 主要试剂 | 第40页 |
| 1.3 主要仪器及器材 | 第40页 |
| 2 方法 | 第40-45页 |
| 2.1 采用Cre/Loxp系统分别构建OGA肠上皮特异敲除和过表达小鼠 | 第40-43页 |
| 2.1.1 通过基因改造和筛选获得Oga~(flox-neo/+)小鼠 | 第40-42页 |
| 2.1.2 OGA肠上皮特异敲除小鼠的构建 | 第42-43页 |
| 2.1.3 OGA肠上皮过表达小鼠的构建 | 第43页 |
| 2.2 小鼠琼脂糖电泳基因型鉴定 | 第43-45页 |
| 2.2.1 鼠尾DNA提取 | 第43页 |
| 2.2.2 鼠尾DNA聚合酶链式反应(PCR) | 第43-44页 |
| 2.2.3 琼脂糖凝胶电泳及基因型鉴定 | 第44-45页 |
| 2.3 组织标本采集 | 第45页 |
| 2.3.1 组织固定 | 第45页 |
| 2.3.2 组织RNA Later固定和液氮保存 | 第45页 |
| 2.4 组织蛋白印迹实验(Western Blot,WB)和组织免疫组织化学 | 第45页 |
| 2.4.1 小鼠组织总蛋白提取 | 第45页 |
| 2.4.2 免疫组织化学 | 第45页 |
| 3 结果 | 第45-50页 |
| 3.1 OGA-IKO和OGA-IKI小鼠基因型鉴定结果 | 第45-47页 |
| 3.1.1 OGA-IKO小鼠基因型鉴定结果 | 第45-46页 |
| 3.1.2 OGA-IKI小鼠基因型鉴定结果 | 第46-47页 |
| 3.2 OGA-IKO和OGA-IKI小鼠模型验证 | 第47-50页 |
| 3.2.1 OGA-IKO小鼠验证 | 第47-49页 |
| 3.2.2 OGA-IK1小鼠验证 | 第49-50页 |
| 4.讨论 | 第50-51页 |
| 第三部分 OGA肠上皮特异敲除在DSS诱导的结肠炎中发挥保护作用 | 第51-56页 |
| 1 材料 | 第51-52页 |
| 1.1 实验动物 | 第51页 |
| 1.2 主要试剂及药物 | 第51页 |
| 1.3 主要仪器及器材 | 第51-52页 |
| 2 方法 | 第52-53页 |
| 2.1 小鼠分组 | 第52页 |
| 2.2 葡聚糖硫酸钠诱导小鼠小鼠结肠炎及表型观察 | 第52页 |
| 2.2.1 DSS溶液配制 | 第52页 |
| 2.2.2 小鼠结肠炎造模方法 | 第52页 |
| 2.3 损伤和炎症程度的评估 | 第52-53页 |
| 2.4 免疫组化和Western blot | 第53页 |
| 2.5 数据处理 | 第53页 |
| 3 结果 | 第53-56页 |
| 3.1 OGA肠上皮特异敲除后对DSS敏感性下降 | 第53-54页 |
| 3.2 OGA肠上皮特异敲除后结肠组织炎症及病理学改变减轻 | 第54-56页 |
| 4.讨论 | 第56页 |
| 第四部分 OGA敲减和过表达细胞系的建立 | 第56-60页 |
| 1.材料 | 第56-57页 |
| 1.1 实验细胞和转染病毒 | 第56-57页 |
| 1.2 主要试剂及药物 | 第57页 |
| 1.3 主要仪器及器材 | 第57页 |
| 2 方法 | 第57-59页 |
| 2.1 试剂的配制 | 第57页 |
| 细胞培养基的配制 | 第57页 |
| 2.2 细胞培养 | 第57-58页 |
| 2.2.1 细胞复苏 | 第57-58页 |
| 2.2.2 细胞传代 | 第58页 |
| 2.2.3 细胞冻存 | 第58页 |
| 2.3 细胞病毒转染 | 第58页 |
| 2.4 OGA敲减细胞系和OGA过表达细胞系验证 | 第58-59页 |
| 2.4.1 细胞总蛋白提取 | 第58-59页 |
| 2.4.2 Western Blot验证细胞OGA敲减/过表达效率 | 第59页 |
| 3.结果 | 第59-60页 |
| 3.1 OGA敲除/过表达细胞系验证 | 第59-60页 |
| 4.讨论 | 第60页 |
| 第五部分 OGA敲减通过促进细胞凋亡并影响内质网功能减轻炎症反应 | 第60-65页 |
| 1.材料 | 第60-61页 |
| 1.1 实验细胞 | 第60页 |
| 1.2 主要试剂及药物 | 第60-61页 |
| 1.3 主要仪器及器材 | 第61页 |
| 2 方法 | 第61页 |
| 2.1 OGA敲减细胞系细胞周期和凋亡的检测 | 第61页 |
| 2.1.1 样本制备 | 第61页 |
| 2.1.2 凋亡和周期的检测 | 第61页 |
| 2.2 细胞和小鼠结肠组织透射电镜检测 | 第61页 |
| 2.3 数据处理 | 第61页 |
| 3.结果 | 第61-63页 |
| 3.1 OGA敲除后促进细胞凋亡 | 第61-62页 |
| 3.2 OGA敲除后促进细胞内质网增生并影响内质网应激相关蛋白表达 | 第62-63页 |
| 3.2.1 OGA敲减促进内质网增生 | 第62-63页 |
| 3.2.2 OGA敲减引起内质网应激相关蛋白改变 | 第63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 第六部分 OGA肠上皮特异敲除改变肠道菌群减轻DSS诱导的结肠炎症反应 | 第65-71页 |
| 1 材料 | 第65页 |
| 1.1 实验动物 | 第65页 |
| 1.2 主要试剂及药物 | 第65页 |
| 1.3 主要仪器及器材 | 第65页 |
| 2 方法 | 第65-66页 |
| 2.1 小鼠分组 | 第65页 |
| 2.2 样本采集及送检 | 第65页 |
| 2.3 16SrDNA测序 | 第65-66页 |
| 3 结果 | 第66-70页 |
| 3.1 OGA肠上皮敲除后小鼠肠道菌群的多样性增加 | 第66-67页 |
| 3.2 绘制物种丰度柱状图 | 第67-69页 |
| 3.3 OGA肠上皮敲除后抗炎菌群丰度增加促炎菌群丰度减少 | 第69-70页 |
| 4 讨论 | 第70-71页 |
| 小结 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-85页 |
| 个人简历和研究成果 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
