| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 0 引言 | 第15-17页 |
| 1 绪论 | 第17-26页 |
| 1.1 轮状病毒的研究现状 | 第17-19页 |
| 1.1.1 概况 | 第17页 |
| 1.1.2 轮状病毒基因组特征 | 第17-18页 |
| 1.1.3 轮状病毒的流行病学特点 | 第18页 |
| 1.1.4 轮状病毒的检测方法 | 第18-19页 |
| 1.2 星状病毒的研究现状 | 第19-21页 |
| 1.2.1 概况 | 第19页 |
| 1.2.2 星状病毒病毒生物学特征 | 第19页 |
| 1.2.3 星状病毒的流行学特点 | 第19-20页 |
| 1.2.4 星状病毒的检测方法 | 第20-21页 |
| 1.3 核酸检测标准样品研究进展 | 第21-24页 |
| 1.3.1 全病毒颗粒 | 第21-22页 |
| 1.3.2 裸露DNA或RNA | 第22页 |
| 1.3.3 装甲RNA | 第22-24页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第24-26页 |
| 2 轮状病毒标准样品的研制 | 第26-53页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-27页 |
| 2.1.1 实验所需菌株和质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.1.1 宿主细菌 | 第26页 |
| 2.1.1.2 表达质粒 | 第26页 |
| 2.1.1.3 主要实验耗材 | 第26页 |
| 2.1.1.4 主要实验试剂 | 第26-27页 |
| 2.2 主要仪器 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-35页 |
| 2.3.1 引物和探针 | 第28页 |
| 2.3.2 目的片段的合成 | 第28-29页 |
| 2.3.3 重组质粒的构建 | 第29页 |
| 2.3.4 重组质粒的酶切鉴定 | 第29-31页 |
| 2.3.5 重组质粒pET-QβSNRV转化BL21大肠杆菌感受态细胞 | 第31页 |
| 2.3.6 病毒样颗粒的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.7 电镜观察 | 第32页 |
| 2.3.8 残留重组质粒的检测 | 第32-33页 |
| 2.3.9 初步定值 | 第33-35页 |
| 2.3.10 均匀性分析 | 第35页 |
| 2.3.11 稳定性实验 | 第35页 |
| 2.4 实验结果 | 第35-50页 |
| 2.4.1 诱导用重组质粒的鉴定 | 第35-36页 |
| 2.4.2 pGEM-MulV重组质粒的鉴定 | 第36页 |
| 2.4.3 病毒样颗粒的诱导表达结果 | 第36-42页 |
| 2.4.4 电镜观察 | 第42页 |
| 2.4.5 残留质粒的检测 | 第42-43页 |
| 2.4.7 cRNA标准曲线的构建 | 第43页 |
| 2.4.8 初步定值及其不确定度的分析 | 第43-44页 |
| 2.4.9 均匀性实验结果分析 | 第44页 |
| 2.4.10 稳定性实验结果分析 | 第44-50页 |
| 2.5 讨论 | 第50-53页 |
| 3 星状病毒标准样品的研制 | 第53-71页 |
| 3.1 材料与方法 | 第53页 |
| 3.1.1 实验所需菌株和质粒 | 第53页 |
| 3.1.1.1 宿主细菌 | 第53页 |
| 3.1.1.2 表达质粒 | 第53页 |
| 3.1.1.3 主要实验耗材 | 第53页 |
| 3.1.1.4 主要实验试剂 | 第53页 |
| 3.1.1.5 培养基和溶液的配置 | 第53页 |
| 3.2 主要仪器 | 第53页 |
| 3.3 实验方法 | 第53-56页 |
| 3.3.1 引物和探针的合成 | 第53页 |
| 3.3.2 目的片段的合成 | 第53-54页 |
| 3.3.3 重组质粒的构建 | 第54页 |
| 3.3.5 病毒样颗粒的制备 | 第54页 |
| 3.3.6 电镜观察 | 第54页 |
| 3.3.7 残留重组质粒的检测 | 第54-55页 |
| 3.3.8 初步定值 | 第55页 |
| 3.3.9 均匀性实验 | 第55页 |
| 3.3.10 稳定性实验 | 第55-56页 |
| 3.4 实验结果 | 第56-69页 |
| 3.4.1 诱导用重组质粒的鉴定 | 第56页 |
| 3.4.2 病毒样颗粒的的诱导表达结果 | 第56-61页 |
| 3.4.3 电镜观察 | 第61-62页 |
| 3.4.5 Real-timeRT-PCR反应体系的优化 | 第62-63页 |
| 3.4.6 cRNA标准曲线的构建 | 第63页 |
| 3.4.7 初步定值及其不确定度的分析 | 第63-64页 |
| 3.4.8 均匀性实验结果 | 第64页 |
| 3.4.9 稳定性实验结果 | 第64-69页 |
| 3.5 讨论 | 第69-71页 |
| 4 4 种食源性病毒的多联装甲RNA标准样品的研制 | 第71-98页 |
| 4.1 材料与方法 | 第71页 |
| 4.1.1 实验所需菌株和质粒 | 第71页 |
| 4.2 主要仪器 | 第71页 |
| 4.3 实验方法 | 第71-75页 |
| 4.3.1 引物和探针的合成 | 第71-72页 |
| 4.3.2 目的片段的合成 | 第72页 |
| 4.3.3 重组质粒的构建 | 第72页 |
| 4.3.4 重组质粒的鉴定 | 第72-73页 |
| 4.3.5 多联病毒病毒样颗粒的制备 | 第73页 |
| 4.3.5.1 病毒样颗粒的诱导表达及其优化 | 第73页 |
| 4.3.5.2 病毒样颗粒的初步纯化 | 第73页 |
| 4.3.5.3 装甲RNA的丙烯葡聚糖凝胶层析纯化 | 第73页 |
| 4.3.6 电镜观察 | 第73页 |
| 4.3.7 残留重组质粒的鉴定 | 第73-74页 |
| 4.3.8 初步定值 | 第74-75页 |
| 4.3.9 均匀性实验 | 第75页 |
| 4.3.10 稳定性实验 | 第75页 |
| 4.4 实验结果 | 第75-96页 |
| 4.4.1 诱导用重组质粒的鉴定 | 第75-76页 |
| 4.4.2 病毒样颗粒的的诱导表达结果 | 第76-81页 |
| 4.4.3 电镜观察 | 第81-82页 |
| 4.4.4 残留质粒的鉴定 | 第82页 |
| 4.4.5 Real-timeRT-PCR反应体系的优化 | 第82-83页 |
| 4.4.6 cRNA标准曲线的构建 | 第83页 |
| 4.4.7 初步定值及其不确定度的分析 | 第83-88页 |
| 4.4.8 均匀性实验结果分析 | 第88页 |
| 4.4.9 稳定性实验 | 第88-96页 |
| 4.5 讨论 | 第96-98页 |
| 5 冻干对装甲RNA标准样品稳定性的影响研究 | 第98-111页 |
| 5.1 实验材料 | 第98页 |
| 5.2 环糊精类冻干附着剂的浓度的选择 | 第98页 |
| 5.3 冻干条件的探究 | 第98页 |
| 5.3.1 冻干体积的选择 | 第98页 |
| 5.3.2 冻干前是否需要预冷 | 第98页 |
| 5.4 冻干样品的稳定性实验 | 第98页 |
| 5.5 实验结果 | 第98-110页 |
| 5.5.1 环糊精类冻干附着剂浓度的选择 | 第98-99页 |
| 5.5.2 冻干体积和是否预冷的选择 | 第99-101页 |
| 5.5.3 冻干样品的稳定性实验结果分析 | 第101-110页 |
| 5.6 讨论 | 第110-111页 |
| 6 结论 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-121页 |
| 硕士期间取得的研究成果 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
