| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 英文缩写词表 | 第9-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-19页 |
| 1.1 简介基因组靶向修饰技术 | 第11-12页 |
| 1.2 简介CRISPR/Cas9系统 | 第12-15页 |
| 1.3 简介诱导性多潜能干细胞(iPS cells) | 第15-17页 |
| 1.4 课题研究意义 | 第17-18页 |
| 1.5 课题的技术路线 | 第18-19页 |
| 第2章 基于CRISPR/Cas9的转录因子激活系统的构建及其体外实验研究 | 第19-55页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-23页 |
| 2.1.1 细胞、菌株及质粒载体 | 第19-20页 |
| 2.1.2 材料及试剂 | 第20-21页 |
| 2.1.3 试剂的配制 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-45页 |
| 2.2.1 Cas9m4-VP64融合蛋白表达载体的构建 | 第23-33页 |
| 2.2.2 Western Blot检测融合蛋白Cas9m4-VP64在真核细胞中的表达 | 第33-34页 |
| 2.2.3 靶向iPS四个转录因子的sgRNA的筛选及活性检测 | 第34-42页 |
| 2.2.4 qRT-PCR检测CRISPR/Cas9介导的转录因子激活系统对靶基因表达水平的调控 | 第42-45页 |
| 2.3 实验结果 | 第45-54页 |
| 2.3.1 Cas9m4-VP64融合蛋白表达载体的构建 | 第45-48页 |
| 2.3.2 真核细胞中融合蛋白Cas9m4-VP64的表达检测 | 第48页 |
| 2.3.3 Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc的转录激活sgRNA筛选及活性检测 | 第48-51页 |
| 2.3.4 CRISPR/Cas9介导的转录因子激活系统对靶基因表达水平的调控 | 第51-54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-55页 |
| 第3章 CRISPR/Cas9介导的DNA去甲基化激活系统的构建及其体外实验研究 | 第55-75页 |
| 3.1 实验材料 | 第55-56页 |
| 3.1.1 细胞和菌种 | 第55页 |
| 3.1.2 材料及试剂 | 第55页 |
| 3.1.3 试剂的配制 | 第55-56页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-66页 |
| 3.2.1 Cas9m4-TET1-CD融合蛋白表达载体的构建 | 第56-58页 |
| 3.2.2 Western Blot检测融合蛋白Cas9m4-TET1-CD在真核细胞中的表达 | 第58页 |
| 3.2.3 BSP检测CRISPR/Cas9介导的DNA去甲基化激活系统对靶位点DNA甲基化水平的影响 | 第58-66页 |
| 3.2.4 qRT-PCR检测CRISPR/Cas9介导的DNA去甲基化激活系统对靶基因表达水平的调控 | 第66页 |
| 3.3 实验结果 | 第66-72页 |
| 3.3.1 Cas9m4-TET1-CD融合蛋白载体的构建 | 第66-68页 |
| 3.3.2 真核细胞中融合蛋白Cas9m4-TET1-CD的表达检测 | 第68-69页 |
| 3.3.3 CRISPR/Cas9介导的DNA去甲基化激活系统对靶位点DNA去甲基化的影响 | 第69-70页 |
| 3.3.4 CRISPR/Cas9介导的DNA去甲基化激活系统对靶基因表达水平的调控 | 第70-72页 |
| 3.4 讨论 | 第72-75页 |
| 第4章 结论 | 第75-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 附录 | 第83-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
| 攻读硕士学位期间科研成果 | 第89页 |
