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稳定表达ST3GALⅠ基因的R-MDCK细胞株的建立

致谢第4-8页
摘要第8-9页
缩略词表第9-10页
文献综述第10-22页
    1 禽流感病毒概述第10-11页
        1.1 禽流感病毒历史第10页
        1.2 禽流感病毒亚型,传染途径及致病特点第10-11页
        1.3 禽流感病毒的基因组结构、编码的蛋白质及抗原变异基础第11页
    2 H9亚型禽流感病毒的流行动态第11-14页
        2.1 H9亚型禽流感病毒在家禽当中的流行现状第11-12页
        2.2 H9亚型禽流感病毒在野鸟中的流行现状第12页
        2.3 H9亚型禽流感病毒在猪群中的流行现状第12-13页
        2.4 H9亚型禽流感病毒在人群中的流行现状第13-14页
    3 流感病毒受体的研究第14-18页
        3.1 流感病毒受体的性质第14-15页
        3.2 流感病毒受体的种类及相关的酶类第15-16页
        3.3 流感病毒受体的分布第16-17页
        3.4 影响流感病毒与细胞受体结合的因素第17-18页
    4 禽流感病毒生产介质的研究第18-19页
        4.1 禽流感病毒生产介质的种类及优缺点第18页
        4.2 新型生物反应器在生产禽流感疫苗上的应用第18-19页
    5 禽流感病毒疫苗的研究进展第19-22页
        5.1 全病毒灭活疫苗第19页
        5.2 重组活载体疫苗第19-20页
        5.3 DNA疫苗第20页
        5.4 通用型流感疫苗第20页
        5.5 新型弱毒疫苗第20-22页
引言第22-23页
试验一 真核表达质粒pIRES-ST3GAL Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的初步表达第23-32页
    1 材料和方法第23-28页
        1.1 材料第23-25页
            1.1.1 载体和菌株第23页
            1.1.2 主要生化试剂第23页
            1.1.3 主要仪器第23页
            1.1.4 引物的设计与合成第23-24页
            1.1.5 试剂的配制第24-25页
                1.1.5.1 琼脂糖凝胶电泳试剂配制第24页
                1.1.5.2 大肠杆菌转化用溶液第24-25页
                1.1.5.3 感受态细胞制备第25页
        1.2 方法第25-28页
            1.2.1 pIRES-ST3GAL Ⅰ重组质粒的构建第25-27页
                1.2.1.1 鸡ST3GAL Ⅰ基因的扩增及纯化回收第25-27页
                1.2.1.2 PCR产物ST3GAL Ⅰ基因和pIRES载体的酶切回收及连接第27页
                1.2.1.3 连接产物的转化第27页
                1.2.1.4 重组质粒的鉴定第27页
            1.2.2 ST3GAL Ⅰ蛋白的原核表达第27-28页
    2 结果与分析第28-30页
        2.1 鸡ST3GAL Ⅰ基因的PCR扩增结果第28页
        2.2 pIRES-ST3GAL Ⅰ重组质粒的酶切、PCR和测序鉴定第28-29页
        2.3 不同物种ST3GalI氨基酸的同源性分析第29页
        2.4 pIRES-ST3GAL Ⅰ在DH5α中的初步表达第29-30页
    3 讨论第30-32页
试验二 适应H9亚型低致病性禽流感病毒增殖的重组R-MDCK细胞系的建立第32-40页
    1 材料与方法第32-35页
        1.1 材料第32-33页
            1.1.1 细胞、毒株和质粒第32页
            1.1.2 主要工具酶及试剂第32页
            1.1.3 主要仪器第32页
            1.1.4 所需试剂配制第32-33页
        1.2 方法第33-35页
            1.2.1 MDCK细胞转染条件优化第33页
                1.2.1.1 MDCK细胞生长曲线的测定第33页
                1.2.1.2 G418筛选浓度的测定第33页
            1.2.2 重组质粒pIRES-ST3GAL Ⅰ转染MDCK细胞第33-34页
            1.2.3 抗性细胞的筛选第34页
            1.2.4 抗性细胞克隆的鉴定第34页
                1.2.4.1 PCR鉴定第34页
                1.2.4.2 RT-PCR鉴定第34页
            1.2.5 H9亚型禽流感病毒在R-MDCK细胞内的增殖试验第34-35页
                1.2.5.1 血凝试验的测定第34页
                1.2.5.2 TCID50的测定第34-35页
                1.2.5.3 蚀斑的测定第35页
    2 结果第35-37页
        2.1 MDCK细胞生长曲线的测定第35页
        2.2 筛选培养基中G418浓度的选择第35-36页
        2.3 MDCK细胞和R-MDCK细胞的PCR和RT-PCR鉴定第36页
        2.4 R-MDCK细胞培养H9亚型禽流感病毒试验第36-37页
    3 讨论第37-40页
全文总结第40-41页
参考文献第41-48页
ABSTRACT第48-49页
附录第50-51页
个人简介第51页

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