| 致谢 | 第4-8页 |
| 摘要 | 第8-9页 |
| 缩略词表 | 第9-10页 |
| 文献综述 | 第10-22页 |
| 1 禽流感病毒概述 | 第10-11页 |
| 1.1 禽流感病毒历史 | 第10页 |
| 1.2 禽流感病毒亚型,传染途径及致病特点 | 第10-11页 |
| 1.3 禽流感病毒的基因组结构、编码的蛋白质及抗原变异基础 | 第11页 |
| 2 H9亚型禽流感病毒的流行动态 | 第11-14页 |
| 2.1 H9亚型禽流感病毒在家禽当中的流行现状 | 第11-12页 |
| 2.2 H9亚型禽流感病毒在野鸟中的流行现状 | 第12页 |
| 2.3 H9亚型禽流感病毒在猪群中的流行现状 | 第12-13页 |
| 2.4 H9亚型禽流感病毒在人群中的流行现状 | 第13-14页 |
| 3 流感病毒受体的研究 | 第14-18页 |
| 3.1 流感病毒受体的性质 | 第14-15页 |
| 3.2 流感病毒受体的种类及相关的酶类 | 第15-16页 |
| 3.3 流感病毒受体的分布 | 第16-17页 |
| 3.4 影响流感病毒与细胞受体结合的因素 | 第17-18页 |
| 4 禽流感病毒生产介质的研究 | 第18-19页 |
| 4.1 禽流感病毒生产介质的种类及优缺点 | 第18页 |
| 4.2 新型生物反应器在生产禽流感疫苗上的应用 | 第18-19页 |
| 5 禽流感病毒疫苗的研究进展 | 第19-22页 |
| 5.1 全病毒灭活疫苗 | 第19页 |
| 5.2 重组活载体疫苗 | 第19-20页 |
| 5.3 DNA疫苗 | 第20页 |
| 5.4 通用型流感疫苗 | 第20页 |
| 5.5 新型弱毒疫苗 | 第20-22页 |
| 引言 | 第22-23页 |
| 试验一 真核表达质粒pIRES-ST3GAL Ⅰ的构建及其在大肠杆菌中的初步表达 | 第23-32页 |
| 1 材料和方法 | 第23-28页 |
| 1.1 材料 | 第23-25页 |
| 1.1.1 载体和菌株 | 第23页 |
| 1.1.2 主要生化试剂 | 第23页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第23页 |
| 1.1.4 引物的设计与合成 | 第23-24页 |
| 1.1.5 试剂的配制 | 第24-25页 |
| 1.1.5.1 琼脂糖凝胶电泳试剂配制 | 第24页 |
| 1.1.5.2 大肠杆菌转化用溶液 | 第24-25页 |
| 1.1.5.3 感受态细胞制备 | 第25页 |
| 1.2 方法 | 第25-28页 |
| 1.2.1 pIRES-ST3GAL Ⅰ重组质粒的构建 | 第25-27页 |
| 1.2.1.1 鸡ST3GAL Ⅰ基因的扩增及纯化回收 | 第25-27页 |
| 1.2.1.2 PCR产物ST3GAL Ⅰ基因和pIRES载体的酶切回收及连接 | 第27页 |
| 1.2.1.3 连接产物的转化 | 第27页 |
| 1.2.1.4 重组质粒的鉴定 | 第27页 |
| 1.2.2 ST3GAL Ⅰ蛋白的原核表达 | 第27-28页 |
| 2 结果与分析 | 第28-30页 |
| 2.1 鸡ST3GAL Ⅰ基因的PCR扩增结果 | 第28页 |
| 2.2 pIRES-ST3GAL Ⅰ重组质粒的酶切、PCR和测序鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3 不同物种ST3GalI氨基酸的同源性分析 | 第29页 |
| 2.4 pIRES-ST3GAL Ⅰ在DH5α中的初步表达 | 第29-30页 |
| 3 讨论 | 第30-32页 |
| 试验二 适应H9亚型低致病性禽流感病毒增殖的重组R-MDCK细胞系的建立 | 第32-40页 |
| 1 材料与方法 | 第32-35页 |
| 1.1 材料 | 第32-33页 |
| 1.1.1 细胞、毒株和质粒 | 第32页 |
| 1.1.2 主要工具酶及试剂 | 第32页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第32页 |
| 1.1.4 所需试剂配制 | 第32-33页 |
| 1.2 方法 | 第33-35页 |
| 1.2.1 MDCK细胞转染条件优化 | 第33页 |
| 1.2.1.1 MDCK细胞生长曲线的测定 | 第33页 |
| 1.2.1.2 G418筛选浓度的测定 | 第33页 |
| 1.2.2 重组质粒pIRES-ST3GAL Ⅰ转染MDCK细胞 | 第33-34页 |
| 1.2.3 抗性细胞的筛选 | 第34页 |
| 1.2.4 抗性细胞克隆的鉴定 | 第34页 |
| 1.2.4.1 PCR鉴定 | 第34页 |
| 1.2.4.2 RT-PCR鉴定 | 第34页 |
| 1.2.5 H9亚型禽流感病毒在R-MDCK细胞内的增殖试验 | 第34-35页 |
| 1.2.5.1 血凝试验的测定 | 第34页 |
| 1.2.5.2 TCID50的测定 | 第34-35页 |
| 1.2.5.3 蚀斑的测定 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-37页 |
| 2.1 MDCK细胞生长曲线的测定 | 第35页 |
| 2.2 筛选培养基中G418浓度的选择 | 第35-36页 |
| 2.3 MDCK细胞和R-MDCK细胞的PCR和RT-PCR鉴定 | 第36页 |
| 2.4 R-MDCK细胞培养H9亚型禽流感病毒试验 | 第36-37页 |
| 3 讨论 | 第37-40页 |
| 全文总结 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-48页 |
| ABSTRACT | 第48-49页 |
| 附录 | 第50-51页 |
| 个人简介 | 第51页 |
