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嗜热四膜虫chromodomain蛋白Tcd1磷酸化位点的突变和定位分析

中文摘要第12-14页
ABSTRACT第14-16页
第一章 文献综述第17-31页
    1.1 Chromodomain蛋白概述及分类第17-18页
    1.2 Chromodomain的结构特征第18-20页
    1.3 Chromodomain蛋白的功能第20-21页
        1.3.1 Chromodomain蛋白和组蛋白甲基化位点结合调控转录沉默第20页
        1.3.2 Chromodomain蛋白作为酶在体内发挥作用第20页
        1.3.3 Chromodomain蛋白结合RNA调控转录过程第20页
        1.3.4 Chromodomain蛋白与染色质的结合受到不同修饰的调控第20-21页
    1.4 嗜热四膜虫概述第21-24页
    1.5 本课题的研究意义第24-25页
    参考文献第25-31页
第二章 Tcd1蛋白及其磷酸化位点的分析第31-40页
    2.1 前言第31页
    2.2 实验材料第31-32页
        2.2.1 菌株和质粒第31页
        2.2.2 实验试剂第31页
        2.2.3 实验仪器及设备第31页
        2.2.4 主要试剂的制备第31-32页
    2.3 实验方法第32-35页
        2.3.1 嗜热四膜虫的培养第32-33页
        2.3.2 Western blot第33-34页
        2.3.3 免疫共沉淀第34页
        2.3.4 SDS-PAGE胶银染分析第34-35页
    2.4 结果第35-37页
        2.4.1 Tcd1蛋白序列及磷酸化位点分析第35页
        2.4.2 Tcd1蛋白的western blot及磷酸化位点分析第35-36页
        2.4.3 Tcd1与多种蛋白共同参与到DNA删除与修复过程第36-37页
    2.5 讨论第37-38页
    参考文献第38-40页
第三章 磷酸化Tcd1影响了其在亲本大核的定位第40-53页
    3.1 前言第40页
    3.2 实验材料第40-41页
        3.2.1 菌株和质粒第40页
        3.2.2 实验试剂第40页
        3.2.3 引物第40-41页
        3.2.4 实验仪器与设备第41页
        3.2.5 主要试剂的配制第41页
    3.3 实验方法第41-46页
        3.3.1 模拟磷酸化突变第41-42页
        3.3.2 过表达载体的构建第42-43页
        3.3.3 嗜热四膜虫细胞转化第43-44页
        3.3.4 四膜虫转化菌株的筛选第44-45页
        3.3.5 嗜热四膜虫的培养、饥饿及配对第45页
        3.3.6 间接免疫荧光定位第45-46页
    3.4 结果第46-50页
        3.4.1 Tcd1磷酸化突变体的构建第46-48页
        3.4.2 Tcd1的磷酸化修饰影响了其在亲本大核的定位第48-50页
    3.5 讨论第50-51页
    参考文献第51-53页
第四章 去磷酸化Tcd1在发育的新大核上出现异常定位第53-64页
    4.1 前言第53页
    4.2 实验材料第53-54页
        4.2.1 菌株和质粒第53页
        4.2.2 试剂与工具酶第53页
        4.2.3 引物第53页
        4.2.4 实验仪器与设备第53页
        4.2.5 主要试剂的配制第53-54页
    4.3 实验方法第54-57页
        4.3.1 Tcd1去磷酸化突变第54-55页
        4.3.2 过表达载体的构建第55-56页
        4.3.3 嗜热四膜虫细胞转化第56页
        4.3.4 四膜虫转化细胞株的筛选第56页
        4.3.5 嗜热四膜虫的培养、饥饿及配对第56页
        4.3.6 间接免疫荧光定位第56-57页
        4.3.7 Westernblot第57页
    4.4 结果第57-62页
        4.4.1 Tcd1去磷酸化突变体的构建第57-58页
        4.4.2 去磷酸化Tcd1在新大核发育后期出现异常凝集第58-60页
        4.4.3 Tcd1S3A和Pdd1在新发育的大核中不能共定位第60-61页
        4.4.4 Tcd1的去磷酸化程度调节了其在新大核上的定位第61-62页
    4.5 讨论第62-63页
    参考文献第63-64页
附录第64-65页
总结与展望第65-67页
    总结第65-66页
    展望第66-67页
攻读学位期间取得的研究成果第67-68页
致谢第68-70页
个人简况及联系方式第70-73页

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