中文摘要 | 第12-14页 |
ABSTRACT | 第14-16页 |
第一章 文献综述 | 第17-31页 |
1.1 Chromodomain蛋白概述及分类 | 第17-18页 |
1.2 Chromodomain的结构特征 | 第18-20页 |
1.3 Chromodomain蛋白的功能 | 第20-21页 |
1.3.1 Chromodomain蛋白和组蛋白甲基化位点结合调控转录沉默 | 第20页 |
1.3.2 Chromodomain蛋白作为酶在体内发挥作用 | 第20页 |
1.3.3 Chromodomain蛋白结合RNA调控转录过程 | 第20页 |
1.3.4 Chromodomain蛋白与染色质的结合受到不同修饰的调控 | 第20-21页 |
1.4 嗜热四膜虫概述 | 第21-24页 |
1.5 本课题的研究意义 | 第24-25页 |
参考文献 | 第25-31页 |
第二章 Tcd1蛋白及其磷酸化位点的分析 | 第31-40页 |
2.1 前言 | 第31页 |
2.2 实验材料 | 第31-32页 |
2.2.1 菌株和质粒 | 第31页 |
2.2.2 实验试剂 | 第31页 |
2.2.3 实验仪器及设备 | 第31页 |
2.2.4 主要试剂的制备 | 第31-32页 |
2.3 实验方法 | 第32-35页 |
2.3.1 嗜热四膜虫的培养 | 第32-33页 |
2.3.2 Western blot | 第33-34页 |
2.3.3 免疫共沉淀 | 第34页 |
2.3.4 SDS-PAGE胶银染分析 | 第34-35页 |
2.4 结果 | 第35-37页 |
2.4.1 Tcd1蛋白序列及磷酸化位点分析 | 第35页 |
2.4.2 Tcd1蛋白的western blot及磷酸化位点分析 | 第35-36页 |
2.4.3 Tcd1与多种蛋白共同参与到DNA删除与修复过程 | 第36-37页 |
2.5 讨论 | 第37-38页 |
参考文献 | 第38-40页 |
第三章 磷酸化Tcd1影响了其在亲本大核的定位 | 第40-53页 |
3.1 前言 | 第40页 |
3.2 实验材料 | 第40-41页 |
3.2.1 菌株和质粒 | 第40页 |
3.2.2 实验试剂 | 第40页 |
3.2.3 引物 | 第40-41页 |
3.2.4 实验仪器与设备 | 第41页 |
3.2.5 主要试剂的配制 | 第41页 |
3.3 实验方法 | 第41-46页 |
3.3.1 模拟磷酸化突变 | 第41-42页 |
3.3.2 过表达载体的构建 | 第42-43页 |
3.3.3 嗜热四膜虫细胞转化 | 第43-44页 |
3.3.4 四膜虫转化菌株的筛选 | 第44-45页 |
3.3.5 嗜热四膜虫的培养、饥饿及配对 | 第45页 |
3.3.6 间接免疫荧光定位 | 第45-46页 |
3.4 结果 | 第46-50页 |
3.4.1 Tcd1磷酸化突变体的构建 | 第46-48页 |
3.4.2 Tcd1的磷酸化修饰影响了其在亲本大核的定位 | 第48-50页 |
3.5 讨论 | 第50-51页 |
参考文献 | 第51-53页 |
第四章 去磷酸化Tcd1在发育的新大核上出现异常定位 | 第53-64页 |
4.1 前言 | 第53页 |
4.2 实验材料 | 第53-54页 |
4.2.1 菌株和质粒 | 第53页 |
4.2.2 试剂与工具酶 | 第53页 |
4.2.3 引物 | 第53页 |
4.2.4 实验仪器与设备 | 第53页 |
4.2.5 主要试剂的配制 | 第53-54页 |
4.3 实验方法 | 第54-57页 |
4.3.1 Tcd1去磷酸化突变 | 第54-55页 |
4.3.2 过表达载体的构建 | 第55-56页 |
4.3.3 嗜热四膜虫细胞转化 | 第56页 |
4.3.4 四膜虫转化细胞株的筛选 | 第56页 |
4.3.5 嗜热四膜虫的培养、饥饿及配对 | 第56页 |
4.3.6 间接免疫荧光定位 | 第56-57页 |
4.3.7 Westernblot | 第57页 |
4.4 结果 | 第57-62页 |
4.4.1 Tcd1去磷酸化突变体的构建 | 第57-58页 |
4.4.2 去磷酸化Tcd1在新大核发育后期出现异常凝集 | 第58-60页 |
4.4.3 Tcd1S3A和Pdd1在新发育的大核中不能共定位 | 第60-61页 |
4.4.4 Tcd1的去磷酸化程度调节了其在新大核上的定位 | 第61-62页 |
4.5 讨论 | 第62-63页 |
参考文献 | 第63-64页 |
附录 | 第64-65页 |
总结与展望 | 第65-67页 |
总结 | 第65-66页 |
展望 | 第66-67页 |
攻读学位期间取得的研究成果 | 第67-68页 |
致谢 | 第68-70页 |
个人简况及联系方式 | 第70-73页 |