| 致谢 | 第5-9页 |
| 摘要 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-17页 |
| 1.1 禽流感概述 | 第10-11页 |
| 1.1.1 禽流感蛋白及其功能 | 第10-11页 |
| 1.2 禽流感病毒的诊断 | 第11页 |
| 1.2.1 病原学诊断 | 第11页 |
| 1.2.2 血清学诊断 | 第11页 |
| 1.2.3 分子生物学诊断技术 | 第11页 |
| 1.3 禽流感疫苗研究现状 | 第11-12页 |
| 1.3.1 灭活疫苗 | 第11-12页 |
| 1.3.2 高致病性禽流感活疫苗 | 第12页 |
| 1.3.3 DNA疫苗的研究 | 第12页 |
| 1.3.4 具有交叉保护的禽流感通用疫苗 | 第12页 |
| 1.3.5 反基因工程疫苗 | 第12页 |
| 1.4 Spyligase技术概述 | 第12-14页 |
| 1.4.1 Spyligase技术发展过程 | 第13-14页 |
| 1.5 多聚体蛋白 | 第14页 |
| 1.6 大肠杆菌表达系统及融合标签 | 第14-16页 |
| 1.6.1 大肠杆菌表达系统 | 第14页 |
| 1.6.2 多聚组氨酸标签 | 第14-15页 |
| 1.6.3 Si标签 | 第15页 |
| 1.6.4 融合标签 | 第15-16页 |
| 1.6.4.1 ArsC标签 | 第15页 |
| 1.6.4.2 SUMO标签 | 第15页 |
| 1.6.4.3 MBP标签 | 第15页 |
| 1.6.4.4 Cherry标签 | 第15页 |
| 1.6.4.5 XTEN标签 | 第15-16页 |
| 1.6.4.6 PEAT标签 | 第16页 |
| 1.6.4.7 pAs200标签 | 第16页 |
| 1.7 展望 | 第16-17页 |
| 2 引言 | 第17-18页 |
| 3 材料与方法 | 第18-26页 |
| 3.1 试验材料 | 第18-22页 |
| 3.1.1 菌种和质粒 | 第18页 |
| 3.1.2 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 3.1.4 主要溶液配制方法 | 第19-22页 |
| 3.1.4.1 常用溶液 | 第19页 |
| 3.1.4.2 DNA电泳相关溶液 | 第19页 |
| 3.1.4.3 细菌培养相关溶液 | 第19-20页 |
| 3.1.4.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳相关溶液 | 第20-21页 |
| 3.1.4.5 蛋白纯化相关溶液 | 第21页 |
| 3.1.4.6 蛋白环化相关试剂 | 第21-22页 |
| 3.2 试验方法 | 第22-26页 |
| 3.2.1 原核表达载体与目的蛋白的获得 | 第22-23页 |
| 3.2.1.1 十种融合标签的获得 | 第22页 |
| 3.2.1.2 Spy-H5HA10与Spyligase目的基因的获得 | 第22-23页 |
| 3.2.2 构建重组质粒 | 第23页 |
| 3.2.3 原核表达载体的双酶切鉴定 | 第23-24页 |
| 3.2.4 重组蛋白的诱导表达和可溶性分析 | 第24-25页 |
| 3.2.4.1 诱导表达 | 第24-25页 |
| 3.2.4.2 可溶性分析 | 第25页 |
| 3.2.5 重组蛋白的纯化 | 第25页 |
| 3.2.6 重组蛋白的脱盐 | 第25-26页 |
| 3.2.7 Spyligase指导Spy-H5HA10多聚体蛋白质的形成 | 第26页 |
| 4 结果与分析 | 第26-40页 |
| 4.1 原核表达载体的构建 | 第26-30页 |
| 4.1.1 十种重组表达载体的酶切获得 | 第26-28页 |
| 4.1.2 目的基因的获得 | 第28-29页 |
| 4.1.2.1 Spy-H5HA10目的基因的获得 | 第28页 |
| 4.1.2.2 Spyligase目的基因的获得 | 第28-29页 |
| 4.1.3 原核表达载体的双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 4.1.3.1 含有Spy-H5HA10目的基因的九种重组载体的双酶切鉴定 | 第29页 |
| 4.1.3.2 含有Spyligase目的基因的重组载体的双酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 4.2 重组蛋白的可溶性分析 | 第30-35页 |
| 4.2.1 含有Spy-H5HA10目的基因的重组蛋白的可溶性分析 | 第30-33页 |
| 4.2.1.1 含有Spy-H5HA10目的基因的九种重组蛋白的可溶性分析 | 第30-32页 |
| 4.2.1.2 His-ArsC-H5HA10重组蛋白的IPTG浓度摸索 | 第32-33页 |
| 4.2.1.3 His-ArsC-H5HA10重组蛋白诱导温度摸索 | 第33页 |
| 4.2.2 含有Spy-H5HA10目的基因的重组蛋白的可溶性分析 | 第33-35页 |
| 4.2.2.1 含有Spyligase目的基因的一种重组蛋白的可溶性分析 | 第33-34页 |
| 4.2.2.2 His-Cherry-Spyligase重组蛋白IPTG浓度摸索 | 第34-35页 |
| 4.2.2.3 His-Cherry-Spyligase重组蛋白诱导温度摸索 | 第35页 |
| 4.3 重组蛋白的纯化 | 第35-37页 |
| 4.3.1 His-ArsC-H5HA10重组蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| 4.3.2 His-Cherry-Spyligase重组蛋白的纯化 | 第36-37页 |
| 4.4 重组蛋白的除盐 | 第37-38页 |
| 4.4.1 His-ArsC-H5HA10重组蛋白的除盐 | 第37-38页 |
| 4.4.2 His-Cherry-Spyligase重组蛋白的除盐 | 第38页 |
| 4.5 Spyligase指导Spy-H5HA10形成多聚体蛋白质 | 第38-40页 |
| 4.5.1 Spyligase和Spy-H5HA101:1混合摸索时间 | 第38-39页 |
| 4.5.2 Spyligase和Spy-H5HA101:1与1：2混合摸索最大量 | 第39-40页 |
| 5 讨论与结论 | 第40-43页 |
| 5.1 讨论 | 第40-41页 |
| 5.2 结论 | 第41-43页 |
| 参考文献 | 第43-49页 |
| 英文摘要 | 第49-50页 |
