| 摘要 | 第3-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 前言 | 第21-27页 |
| 参考文献 | 第24-27页 |
| 第一部分 南蛇藤提取物通过DJ-1抑制人食管鳞癌细胞侵袭迁移及肿瘤干样细胞增殖 | 第27-54页 |
| 1 材料 | 第27-33页 |
| 1.1 药品 | 第27页 |
| 1.2 细胞株 | 第27页 |
| 1.3 引物 | 第27-28页 |
| 1.4 实验动物 | 第28页 |
| 1.5 实验试剂 | 第28-30页 |
| 1.6 主要仪器 | 第30页 |
| 1.7 主要试剂配制 | 第30-33页 |
| 2 方法 | 第33-40页 |
| 2.1 药物准备 | 第33页 |
| 2.2 细胞培养 | 第33页 |
| 2.3 细胞增殖实验(MTT法) | 第33-34页 |
| 2.4 细胞形态学观察 | 第34页 |
| 2.5 细胞侵袭和迁移实验 | 第34页 |
| 2.6 Western blot实验 | 第34-36页 |
| 2.7 RT-qPCR实验 | 第36-37页 |
| 2.8 无血清悬浮培养富集人食管鳞癌干细胞 | 第37页 |
| 2.9 流式细胞分析鉴定细胞表面标记CD90及CD133 | 第37-38页 |
| 2.10 裸鼠皮下移植瘤实验 | 第38页 |
| 2.11 蛋白质双向凝胶电泳 | 第38-39页 |
| 2.12 蛋白质质谱鉴定 | 第39-40页 |
| 2.13 统计学处理 | 第40页 |
| 3 结果 | 第40-47页 |
| 3.1 COE对ECA-109、TE-8细胞增殖及细胞形态的影响 | 第40-41页 |
| 3.2 COE对ECA-109、TE-8细胞迁移、侵袭能力及EMT的影响 | 第41-42页 |
| 3.3 COE对ECA-109、TE-8细胞中OCT4、SOX2及Nanog mRNA的影响 | 第42-43页 |
| 3.4 通过无血清悬浮培养成功富集人食管鳞癌干样细胞ECA-109-S | 第43-44页 |
| 3.5 COE对ECA-109-S细胞增殖能力的影响 | 第44-45页 |
| 3.6 蛋白质组学技术筛选COE作用于ECA-109-S的蛋白靶点 | 第45-47页 |
| 4 讨论 | 第47-50页 |
| 5 参考文献 | 第50-54页 |
| 第二部分 DJ-1通过Wnt/β-catenin信号通路促进人食管鳞癌细胞转移及EMT进程 | 第54-76页 |
| 1 材料 | 第54-57页 |
| 1.1 临床标本收集及病例资料收集 | 第54-55页 |
| 1.2 细胞 | 第55页 |
| 1.3 慢病毒载体 | 第55页 |
| 1.4 实验动物 | 第55页 |
| 1.5 实验试剂 | 第55-56页 |
| 1.6 主要仪器 | 第56页 |
| 1.7 主要试剂配制 | 第56-57页 |
| 2 方法 | 第57-60页 |
| 2.1 组织包埋及切片 | 第57页 |
| 2.2 免疫组织化学 | 第57-58页 |
| 2.3 免疫组化结果判断 | 第58页 |
| 2.4 细胞培养 | 第58页 |
| 2.5 建立TGF-β1诱导的EMT细胞模型 | 第58页 |
| 2.6 Western blot实验 | 第58页 |
| 2.7 稳定过表达DJ-1的食管鳞癌细胞株建立 | 第58页 |
| 2.8 稳定低表达DJ-1的食管鳞癌细胞株建立 | 第58页 |
| 2.9 Edu法检测细胞增殖能力 | 第58-59页 |
| 2.10 平板克隆实验 | 第59页 |
| 2.11 Transwell实验 | 第59页 |
| 2.12 腹腔移植瘤实验 | 第59-60页 |
| 2.13 统计学处理 | 第60页 |
| 3 结果 | 第60-71页 |
| 3.1 DJ-1与食管鳞癌转移和EMT进程密切相关 | 第60-62页 |
| 3.2 DJ-1在食管鳞癌EMT模型中过表达 | 第62-63页 |
| 3.3 DJ-1过表达促进ECA-109的细胞增殖及克隆形成 | 第63-64页 |
| 3.4 过表达DJ-1通过Wnt/β-catenin通路促进ECA-109细胞迁移、侵袭和EMT | 第64-66页 |
| 3.5 削减DJ-1表达抑制了ESCC细胞ECA-109的增殖及克隆形成能力 | 第66-67页 |
| 3.6 削减表达DJ-1通过抑制Wnt/β-catenin通路抑制细胞迁移、侵袭和EMT | 第67-68页 |
| 3.7 抑制Wnt/β-catenin通路可逆转过表达DJ-1引起的细胞恶性生物学特性 | 第68-69页 |
| 3.8 DJ-1对裸鼠腹腔移植瘤生长转移及EMT指标的影响 | 第69-71页 |
| 4 讨论 | 第71-73页 |
| 5 参考文献 | 第73-76页 |
| 第三部分 DJ-1通过促进线粒体生成及呼吸维持人食管鳞癌细胞干细胞特性 | 第76-97页 |
| 1 材料 | 第76-78页 |
| 1.1 临床标本收集 | 第76页 |
| 1.2 细胞 | 第76页 |
| 1.3 慢病毒载体及siRNA | 第76页 |
| 1.4 引物 | 第76-77页 |
| 1.5 实验动物 | 第77页 |
| 1.6 实验试剂 | 第77页 |
| 1.7 主要仪器 | 第77-78页 |
| 1.8 主要试剂配制 | 第78页 |
| 2 方法 | 第78-81页 |
| 2.1 免疫组化 | 第78页 |
| 2.2 免疫组化结果判断 | 第78-79页 |
| 2.3 细胞培养 | 第79页 |
| 2.4 慢病毒载体感染及siRNA转染 | 第79页 |
| 2.5 细胞成球实验 | 第79页 |
| 2.6 RT-qPCR实验 | 第79页 |
| 2.7 裸鼠皮下移植瘤实验 | 第79页 |
| 2.8 线粒体质量检测 | 第79-80页 |
| 2.9 JC-1检测线粒体膜电位 | 第80页 |
| 2.10 透射电镜观察细胞内线粒体 | 第80-81页 |
| 2.11 细胞内ATP检测 | 第81页 |
| 2.12 细胞内总ROS含量测定 | 第81页 |
| 2.13 Western blot | 第81页 |
| 2.14 统计学处理 | 第81页 |
| 3 结果 | 第81-92页 |
| 3.1 在临床食管鳞癌组织中,DJ-1与Nanog、SOX2的表达密切相关 | 第81-84页 |
| 3.2 DJ-1增强ECA-109细胞成球能力及干细胞转录因子的表达 | 第84-85页 |
| 3.3 DJ-1促进裸鼠皮下移植瘤的生长及维持肿瘤干细胞样的特性 | 第85-87页 |
| 3.4 食管鳞癌干细胞中的线粒体生成及氧化呼吸功能增强 | 第87-88页 |
| 3.5 DJ-1可调控人食管鳞癌ECA-109细胞线粒体生成 | 第88-90页 |
| 3.6 DJ-1促进人食管鳞癌细胞线粒体氧化呼吸功能 | 第90-92页 |
| 4 讨论 | 第92-94页 |
| 5 参考文献 | 第94-97页 |
| 第四部分 南蛇藤提取物通过DJ-1介导的线粒体生成调控人食管鳞癌干样细胞侵袭转移 | 第97-112页 |
| 1 材料 | 第97-99页 |
| 1.1 药品准备 | 第97页 |
| 1.2 细胞 | 第97页 |
| 1.3 实验动物 | 第97页 |
| 1.4 实验试剂 | 第97-98页 |
| 1.5 主要实验仪器 | 第98页 |
| 1.6 主要实验试剂配制 | 第98-99页 |
| 2 方法 | 第99-100页 |
| 2.1 细胞用COE及5-Fu配制 | 第99页 |
| 2.2 动物用药准备 | 第99页 |
| 2.3 细胞培养 | 第99页 |
| 2.4 人食管鳞癌干细胞模型的建立 | 第99页 |
| 2.5 成球实验 | 第99页 |
| 2.6 Transwell侵袭及迁移实验 | 第99页 |
| 2.7 Western blot实验 | 第99-100页 |
| 2.8 透射电镜观察细胞内线粒体数量及超微结构 | 第100页 |
| 2.9 线粒体质量检测 | 第100页 |
| 2.10 线粒体膜电位检测 | 第100页 |
| 2.11 腹腔转移瘤实验 | 第100页 |
| 2.12 免疫组织化学 | 第100页 |
| 2.13 统计学分析 | 第100页 |
| 3 结果 | 第100-106页 |
| 3.1 COE抑制人食管鳞癌干细胞成球能力及干细胞转录因子的mRNA表达 | 第100-101页 |
| 3.2 COE抑制人食管鳞癌干细胞迁移、侵袭及EMT进程 | 第101-102页 |
| 3.3 COE抑制人食管鳞癌干细胞线粒体生成 | 第102-103页 |
| 3.4 COE抑制人食管鳞癌干样细胞中线粒体膜电位及线粒体相关蛋白的表达 | 第103-104页 |
| 3.5 COE对人食管鳞癌干细胞裸鼠腹腔转移瘤的影响 | 第104-105页 |
| 3.6 COE抑制腹腔转移瘤组织中DJ-1、Nanog、E-cadherin及PGC-1α的表达 | 第105-106页 |
| 4 讨论 | 第106-109页 |
| 5 参考文献 | 第109-112页 |
| 全文小结 | 第112-113页 |
| 综述(一) 天然药物干预肿瘤干细胞的研究进展 | 第113-122页 |
| 参考文献 | 第118-122页 |
| 综述(二) 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白与恶性肿瘤上皮间质转化研究进展 | 第122-130页 |
| 参考文献 | 第126-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
| 攻读博士期间以第一作者发表的学术论文目录 | 第131-132页 |
