| 主要符号表 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-14页 |
| Abstract | 第14-18页 |
| 前言 | 第19-21页 |
| 第Ⅰ部分：剪切力对氧化应激状态内皮细胞一氧化氮合酶表达的影响 | 第21-47页 |
| 实验材料与方法 | 第23-37页 |
| 1.1 主要材料和仪器设备 | 第23-25页 |
| 1.2 细胞株培养 | 第25-27页 |
| 1.2.1 细胞复苏 | 第25页 |
| 1.2.2 细胞冻存 | 第25-26页 |
| 1.2.3 细胞换液及传代 | 第26页 |
| 1.2.4 收集细胞 | 第26-27页 |
| 1.2.5 细胞计数 | 第27页 |
| 1.3 实验装置 | 第27-29页 |
| 1.3.1 平行板流动小室的构成 | 第27-28页 |
| 1.3.2 流体剪切力的计算 | 第28页 |
| 1.3.3 流体剪切力的加载 | 第28-29页 |
| 1.4 ox-LDL刺激实验 | 第29页 |
| 1.5 Westernblot检测eNOS蛋白的表达情况 | 第29-32页 |
| 1.5.1 配胶 | 第29-30页 |
| 1.5.2 配电泳液以及转膜液等试剂 | 第30-31页 |
| 1.5.3 蛋白提取 | 第31页 |
| 1.5.4 SDS-PAGE电泳 | 第31页 |
| 1.5.5 转膜 | 第31-32页 |
| 1.5.6 封闭 | 第32页 |
| 1.5.7 一抗孵育 | 第32页 |
| 1.5.8 二抗孵育 | 第32页 |
| 1.5.9 化学发光显影 | 第32页 |
| 1.6 q-PCR检测细胞中目的基因的表达 | 第32-35页 |
| 1.6.1 收集各剪切力组的细胞 | 第32-33页 |
| 1.6.2 Trizol法提取细胞总RNA及浓度测定 | 第33页 |
| 1.6.3 qPCR检测eNOSmRNA的表达水平 | 第33-35页 |
| 1.7 NO含量测定 | 第35页 |
| 1.7.1 培养细胞样本前处理 | 第35页 |
| 1.7.2 操作过程 | 第35页 |
| 1.8 统计学方法 | 第35-37页 |
| 结果 | 第37-43页 |
| 2.1 剪切力对eNOS的表达及NO含量的影响 | 第37-38页 |
| 2.1.1 剪切力对eNOS蛋白表达的影响 | 第37页 |
| 2.1.2 剪切力对eNOSmRNA表达的影响 | 第37-38页 |
| 2.1.3 剪切力对NO含量的影响 | 第38页 |
| 2.2 ox-LDL对剪切力作用下eNOS的表达及NO含量的影响 | 第38-40页 |
| 2.2.1 ox-LDL对剪切力作用下eNOS蛋白表达的影响 | 第38-39页 |
| 2.2.2 ox-LDL对剪切力作用下eNOSmRNA表达的影响 | 第39页 |
| 2.2.3 ox-LDL对剪切力作用下NO含量的影响 | 第39-40页 |
| 2.3 剪切力对ox-LDL刺激下eNOS的表达及NO下降率的影响 | 第40-43页 |
| 讨论 | 第43-47页 |
| 第Ⅱ部分：miR-21调节低剪切力诱导的内皮细胞自噬的分子机制 | 第47-79页 |
| 实验材料与方法 | 第51-65页 |
| 1.1 主要材料和仪器设备 | 第51-53页 |
| 1.2 细胞株培养 | 第53-55页 |
| 1.2.1 细胞复苏 | 第53页 |
| 1.2.2 细胞冻存 | 第53-54页 |
| 1.2.3 细胞换液及传代 | 第54页 |
| 1.2.4 收集细胞 | 第54-55页 |
| 1.2.5 细胞计数 | 第55页 |
| 1.3 流体剪切力实验装置 | 第55-56页 |
| 1.3.1 平行板流动小室的构成 | 第55页 |
| 1.3.2 流体剪切力的计算 | 第55-56页 |
| 1.3.3 流体剪切力的加载 | 第56页 |
| 1.4 Westernblot检测LC3,P62蛋白的表达情况 | 第56-59页 |
| 1.4.1 Wesernblot试剂准备 | 第56-57页 |
| (1)SDS-PAGE凝胶制备 | 第56-57页 |
| (2)1×电泳缓冲液 | 第57页 |
| (3)1×转膜缓冲液 | 第57页 |
| (4)10×TBS | 第57页 |
| (5)1×TBST | 第57页 |
| 1.4.2 蛋白提取 | 第57-58页 |
| 1.4.3 BCA蛋白含量测定 | 第58页 |
| 1.4.4 SDS-PAGE电泳 | 第58页 |
| 1.4.5 转膜 | 第58-59页 |
| 1.4.6 封闭 | 第59页 |
| 1.4.7 一抗孵育 | 第59页 |
| 1.4.8 二抗孵育 | 第59页 |
| 1.4.9 化学发光显色 | 第59页 |
| 1.5 提取RNA | 第59-60页 |
| 1.6 qPCR检测miR-21的表达 | 第60-62页 |
| 1.7 细胞免疫荧光 | 第62页 |
| 1.8 细胞转染 | 第62-63页 |
| 1.9 透射电镜 | 第63-64页 |
| 1.10 统计学方法 | 第64-65页 |
| 结果 | 第65-73页 |
| 2.1 低剪切力诱导脐静脉内皮细胞形态的变化 | 第65页 |
| 2.2 低剪切力下调HUVECsmiR-21的表达 | 第65-66页 |
| 2.3 低剪切力对HUVECsLC3荧光斑点表达的影响 | 第66-67页 |
| 2.4 miR-21对低剪切力条件下HUVECs自噬相关蛋白LC3和P62表达的影响 | 第67-70页 |
| 2.5 miR-21对低剪切力条件下HUVECsLC3荧光斑点表达的影响 | 第70-72页 |
| 2.6 透射电镜观察miR-21对HUVECs自噬的影响 | 第72-73页 |
| 讨论 | 第73-79页 |
| 结论 | 第79-81页 |
| 创新与不足 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
| 附录 | 第90-91页 |
