| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 缩略词及中英文对照表 | 第12-14页 |
| 第一章 前言 | 第14-29页 |
| 1.1 嵌合抗原受体T细胞 | 第14-25页 |
| 1.1.1 肿瘤细胞免疫疗法的发展历程 | 第14-16页 |
| 1.1.2 CAR-T细胞基本原理 | 第16-17页 |
| 1.1.3 CAR-T细胞基本结构 | 第17-19页 |
| 1.1.4 CAR-T细胞疗法的发展历程 | 第19-21页 |
| 1.1.5 CAR-T细胞疗法的优势 | 第21-23页 |
| 1.1.6 CAR-T细胞疗法的局限性和解决方法 | 第23-25页 |
| 1.2 脑胶质瘤的危害 | 第25页 |
| 1.3 脑胶质瘤的发病机制 | 第25页 |
| 1.4 脑胶质瘤目前主要治疗手段 | 第25-26页 |
| 1.5 EGFR及其相关受体在脑胶质瘤中的作用 | 第26页 |
| 1.6 EGFR相关药物对于脑胶质瘤的研究进展 | 第26-27页 |
| 1.7 研究目的和研究内容 | 第27-29页 |
| 第二章 靶向EGFR的嵌合抗原受体结构的构建 | 第29-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-35页 |
| 2.1.1 主要试剂及耗材 | 第29-30页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.3 实验试剂的配制 | 第31-33页 |
| 2.1.4 菌株和细胞株 | 第33页 |
| 2.1.5 引物合成 | 第33-35页 |
| 2.2 实验方法 | 第35-49页 |
| 2.2.1 不同结构CAR载体的构建 | 第35-45页 |
| 2.2.2 不同结构CAR质粒在293T细胞中的表达验证 | 第45-49页 |
| 2.3 实验结果 | 第49-53页 |
| 2.3.1 不同结构CAR质粒鉴定结果 | 第49-50页 |
| 2.3.2 蛋白质印迹法鉴定不同结构CAR质粒在293T细胞中表达结果 | 第50-51页 |
| 2.3.3 流式细胞术鉴定不同结构CAR质粒在293T细胞中表达结果 | 第51-53页 |
| 2.4 结果讨论 | 第53-54页 |
| 第三章 靶向EGFR嵌合抗原受体对人原代T淋巴细胞的基因改造 | 第54-71页 |
| 3.1 实验材料 | 第54-55页 |
| 3.1.1 主要试剂及耗材 | 第54-55页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第55页 |
| 3.1.3 菌株和细胞株 | 第55页 |
| 3.2 实验方法 | 第55-63页 |
| 3.2.1 人原代T淋巴细胞的分离培养与鉴定 | 第55-56页 |
| 3.2.2 慢病毒包装方法的选择 | 第56-60页 |
| 3.2.3 慢病毒感染T细胞的条件的优化 | 第60-61页 |
| 3.2.4 不同慢病毒载体感染人原代T淋巴细胞效价的比较 | 第61-62页 |
| 3.2.5 慢病毒浓缩方法的选择 | 第62页 |
| 3.2.6 感染复数的选择 | 第62-63页 |
| 3.3 实验结果 | 第63-69页 |
| 3.3.1 人原代T淋巴细胞的鉴定结果 | 第63页 |
| 3.3.2 不同试剂包装慢病毒的效价 | 第63页 |
| 3.3.3 不同离心时间和感染次数T细胞感染效率 | 第63-64页 |
| 3.3.4 不同慢病毒载体T细胞感染效率 | 第64-68页 |
| 3.3.5 不同浓缩方法浓缩慢病毒液感染T细胞的效价 | 第68页 |
| 3.3.6 不同感染复数下感染T细胞的效价 | 第68-69页 |
| 3.4 结果讨论 | 第69-71页 |
| 第四章 靶向EGFR嵌合抗原受体T细胞的体外抗肿瘤活性研究 | 第71-79页 |
| 4.1 实验材料 | 第71页 |
| 4.1.1 主要试剂及耗材 | 第71页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第71页 |
| 4.1.3 细胞株 | 第71页 |
| 4.2 实验方法 | 第71-74页 |
| 4.2.1 脑胶质瘤细胞系中EGFR表达检测 | 第71页 |
| 4.2.2 CAR-T细胞对不同细胞株的体外杀伤实验 | 第71-73页 |
| 4.2.3 免疫表型的检测 | 第73-74页 |
| 4.2.4 细胞因子分泌 | 第74页 |
| 4.3 实验结果 | 第74-78页 |
| 4.3.1 各细胞株中EGFR表达情况 | 第74-75页 |
| 4.3.2 CAR-T细胞对不同细胞株的杀伤效率 | 第75-77页 |
| 4.3.3 CAR-T细胞活化情况 | 第77页 |
| 4.3.4 细胞因子分泌结果 | 第77-78页 |
| 4.4 结果讨论 | 第78-79页 |
| 全文小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 发表论文及学术成果 | 第87页 |
