| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-23页 |
| 引言 | 第11页 |
| 1.溶藻弧菌的分子生物研究 | 第11-13页 |
| 1.1 弧菌的特性和致病性 | 第11-12页 |
| 1.2 溶藻弧菌的研究概况 | 第12-13页 |
| 2.FadR蛋白的研究进展 | 第13-20页 |
| 2.1 细菌体内的脂肪酸代谢 | 第13-15页 |
| 2.2 FadR蛋白的调控机理 | 第15-19页 |
| 2.3 弧菌的FadR蛋白 | 第19-20页 |
| 3.蛋白质晶体学 | 第20-23页 |
| 3.1 单晶X-射线简介 | 第20-21页 |
| 3.2 蛋白质单晶衍射的基本流程 | 第21-22页 |
| 3.3 结晶的基本原理 | 第22-23页 |
| 第二章 FadR蛋白的克隆、表达和纯化 | 第23-33页 |
| 1.材料 | 第23-24页 |
| 1.1 菌株和质粒 | 第23页 |
| 1.2 主要试剂和药品 | 第23-24页 |
| 1.3 主要仪器 | 第24页 |
| 2.方法 | 第24-28页 |
| 2.1 引物设计 | 第24页 |
| 2.2 基因组DNA的提取 | 第24页 |
| 2.3 PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.4 PCR产物回收和质粒的提取 | 第25页 |
| 2.5 酶切、连接和转化 | 第25-26页 |
| 2.6 重组质粒的验证 | 第26页 |
| 2.7 FadR蛋白的小量诱导表达 | 第26页 |
| 2.8 FadR蛋白的大量表达 | 第26-27页 |
| 2.9 FadR蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| 3.结果与分析 | 第28-31页 |
| 3.1 fadR_val和fadR_vp的PCR扩增 | 第28页 |
| 3.2 fadR基因的PCR验证和测序结果 | 第28-29页 |
| 3.3 FadR蛋白的小量诱导表达 | 第29-30页 |
| 3.4 FadR蛋白的大量表达和纯化 | 第30-31页 |
| 4.讨论 | 第31-32页 |
| 4.1 蛋白的表达和纯化 | 第31-32页 |
| 5.小结 | 第32-33页 |
| 第三章 FadR蛋白及其复合物晶体的筛选和优化 | 第33-37页 |
| 1.材料 | 第33页 |
| 1.1 主要试剂和药品 | 第33页 |
| 1.2 主要仪器 | 第33页 |
| 2.方法 | 第33-34页 |
| 2.1 晶体的筛选 | 第33页 |
| 2.2 晶体的优化和衍射 | 第33-34页 |
| 3.结果与分析 | 第34-35页 |
| 3.1 FadR_val晶体的筛选和优化 | 第34-35页 |
| 3.2 FadR_val+palmitoyl-CoA复合物晶体的筛选和优化 | 第35页 |
| 4.讨论 | 第35-36页 |
| 4.1 蛋白晶体的筛选 | 第35页 |
| 4.2 晶体的优化与衍射 | 第35-36页 |
| 5.小结 | 第36-37页 |
| 第四章 FadR蛋白及其复合物晶体数据收集和结构解析 | 第37-50页 |
| 1.材料 | 第37页 |
| 1.1 主要试剂和药品 | 第37页 |
| 1.2 主要仪器 | 第37页 |
| 2.方法 | 第37-38页 |
| 2.1 数据的收集 | 第37页 |
| 2.2 数据的处理和精修 | 第37-38页 |
| 3.结果与分析 | 第38-46页 |
| 3.1 FadR_val和FadR_val+palmitoyl-CoA晶体衍射数据的收集 | 第38页 |
| 3.2 Vibrio FadR和FadR_ec蛋白序列的比对 | 第38-40页 |
| 3.3 Valginolyticus FadR整体的结构 | 第40-41页 |
| 3.4 Valginolyticus FadR与palmitoyl-CoA复合物的结构 | 第41-44页 |
| 3.5 配体的结合促使构象的变化 | 第44-46页 |
| 4.讨论 | 第46-49页 |
| 5.小结 | 第49-50页 |
| 第五章 FadR蛋白与palmitoyl-CoA以及DNA的相互作用 | 第50-58页 |
| 1.材料 | 第50页 |
| 1.1 主要试剂和药品 | 第50页 |
| 1.2 主要仪器 | 第50页 |
| 2.方法 | 第50-53页 |
| 2.1 iTC(Isothermal Titration Calorimetry,等温滴定量热反应) | 第50-51页 |
| 2.2 SPR(Surface Plasmon Resonance,表面等离子体共振) | 第51-53页 |
| 3.结果与分析 | 第53-56页 |
| 3.1 FadR与palmitoyl-CoA的相互作用 | 第53-55页 |
| 3.2 FadR与DNA的相互作用 | 第55-56页 |
| 4.讨论 | 第56-57页 |
| 4.1 FadR与配体的相互作用 | 第56-57页 |
| 4.2 FadR与DNA的相互作用 | 第57页 |
| 5.小结 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 附录 | 第65-66页 |
