| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 线粒体的简介 | 第8-11页 |
| 1.1.1 线粒体结构与功能 | 第8页 |
| 1.1.2 线粒体基因组 | 第8-9页 |
| 1.1.3 线粒体基因组的内含子 | 第9页 |
| 1.1.4 线粒体基因组编码的内含子剪接 | 第9-10页 |
| 1.1.5 线粒体基因组编码的mRNAs的翻译 | 第10-11页 |
| 1.2 模式生物—粟酒裂殖酵母 | 第11页 |
| 1.3 本课题的研究内容和方法 | 第11-14页 |
| 1.3.1 本课题的研究内容 | 第11-12页 |
| 1.3.2 本课题的研究方法 | 第12-14页 |
| 第二章 粟酒裂殖酵母中Mtf2蛋白缺失后表型的研究 | 第14-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-17页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第14-15页 |
| 2.1.2 所用试剂 | 第15页 |
| 2.1.3 培养基及试剂配制 | 第15-16页 |
| 2.1.4 所用引物 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-24页 |
| 2.2.1 构建pFA6a-kanMX6-mtf2重组质粒 | 第17-22页 |
| 2.2.2 构建△mtf2/P3菌株 | 第22-24页 |
| 2.2.3 P3菌株和△mtf2/P3菌株的点圈实验 | 第24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-27页 |
| 2.3.1 △mtf2/P3菌株的构建 | 第24-26页 |
| 2.3.2 mtf2缺失菌株的表型研究 | 第26-27页 |
| 2.4 讨论 | 第27-28页 |
| 第三章 粟酒裂殖酵母中Mtf2蛋白在细胞中的定位 | 第28-38页 |
| 3.1 实验材料 | 第28-30页 |
| 3.1.1 菌株 | 第28页 |
| 3.1.2 培养基及试剂配制 | 第28-30页 |
| 3.2 实验方法 | 第30-34页 |
| 3.2.1 yLY1菌株线粒体的提取 | 第30-31页 |
| 3.2.2 TritonX-100以及蛋白酶K处理线粒体 | 第31页 |
| 3.2.3 分离线粒体的膜蛋白与可溶性蛋白(碱处理) | 第31-32页 |
| 3.2.4 免疫印迹分析实验 | 第32-34页 |
| 3.3 实验结果 | 第34-37页 |
| 3.3.1 Mtf2蛋白的定位于线粒体的信号肽(MTS)分析 | 第34页 |
| 3.3.2 Mtf2蛋白在酵母细胞中的定位 | 第34-35页 |
| 3.3.3 Mtf2蛋白在酵母线粒体中的定位 | 第35-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-38页 |
| 第四章 粟酒裂殖酵母中Mtf2影响线粒体基因组编码的cox1和cob1的内含子剪接 | 第38-56页 |
| 4.1 实验材料 | 第38-42页 |
| 4.1.1 所用菌株 | 第38页 |
| 4.1.2 所用试剂 | 第38页 |
| 4.1.3 培养基 | 第38页 |
| 4.1.4 试剂配制 | 第38-40页 |
| 4.1.5 所用引物 | 第40-42页 |
| 4.2 实验方法 | 第42-49页 |
| 4.2.1 qRT-PCR检测线粒体基因组的转录水平 | 第42-45页 |
| 4.2.2 Northern blot检测线粒体基因组编码的cox1和cob1 mRNA累积水平 | 第45-49页 |
| 4.2.3 RT-PCR检测线粒体基因组编码的co1和cob1 pre-mRNA以及加工成熟mRNA水平 | 第49页 |
| 4.3 实验结果 | 第49-54页 |
| 4.3.1 RNA的质量检测 | 第49-51页 |
| 4.3.2 Mtf2蛋白对线粒体基因组转录水平的影响 | 第51-52页 |
| 4.3.3 Mtf2蛋白对cox1和cob1 mRNA的累积是必不可少的 | 第52页 |
| 4.3.4 Mtf2蛋白影响cox1和cob1的内含子剪接 | 第52-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-56页 |
| 第五章 粟酒裂殖酵母中Mtf2影响线粒体基因组编码的Cox1的蛋白合成水平 | 第56-64页 |
| 5.1 实验材料 | 第56-57页 |
| 5.1.1 所用菌株 | 第56页 |
| 5.1.2 所用试剂 | 第56页 |
| 5.1.3 培养基 | 第56页 |
| 5.1.4 试剂配制 | 第56-57页 |
| 5.1.5 所用引物 | 第57页 |
| 5.2 实验方法 | 第57-59页 |
| 5.2.1 qRT-PCR检测线粒体基因组的转录水平 | 第57页 |
| 5.2.2 Northern blot检测cox1和cob1 mRNA累积水平 | 第57页 |
| 5.2.3 体内[35S]-Protein Labeling检测线粒体基因组编码的蛋白合成水平 | 第57-59页 |
| 5.3 实验结果 | 第59-62页 |
| 5.3.1 RNA的质量检测 | 第59-60页 |
| 5.3.2 在没有线粒体内含子的背景下,Mtf2蛋白不影响cox1和cob1的mRNA的累积 | 第60-61页 |
| 5.3.3 Mtf2蛋白影响了Cox1的蛋白合成水平 | 第61-62页 |
| 5.4 讨论 | 第62-64页 |
| 第六章 粟酒裂殖酵母中Mtf2蛋白影响线粒体基因组编码的蛋白稳态水平 | 第64-67页 |
| 6.1 实验材料 | 第64页 |
| 6.1.1 所用菌株 | 第64页 |
| 6.1.2 所用试剂 | 第64页 |
| 6.1.3 培养基及试剂配制 | 第64页 |
| 6.2 实验方法 | 第64页 |
| 6.3 实验结果 | 第64-65页 |
| 6.4 讨论 | 第65-67页 |
| 全文总结 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-75页 |
| 附录一 菌种 | 第75-76页 |
| 附录二 实验仪器 | 第76-78页 |
| 在读期间发表的学术论文及成果 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
