| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第1章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 微生物降解氯代芳香族化合物 | 第13-16页 |
| 1.1.1 微生物降解氯代芳香族化合物的机理研究 | 第13-14页 |
| 1.1.2 微生物降解氯代芳香族化合物的过程中的关键酶研究 | 第14-16页 |
| 1.2 2 ,4-二氯苯酚羟化酶(TfdB-JLU) | 第16-18页 |
| 1.2.1 2 ,4-二氯苯酚羟化酶(TfdB-JLU)结构及反应机制 | 第16-17页 |
| 1.2.2 TfdB-JLU与传统TfdB酶相比具有较广的底物谱 | 第17-18页 |
| 1.3 酶非专一性(Enzymepromiscuity) | 第18-21页 |
| 1.3.1 酶非专一性概述 | 第18-19页 |
| 1.3.2 酶非专一性分类 | 第19页 |
| 1.3.3 酶非专一性改造的策略和研究进展 | 第19-21页 |
| 1.4 酶结构改造与酶功能性研究 | 第21-22页 |
| 1.4.1 酶活性中心区域改造的研究 | 第21-22页 |
| 1.4.2 底物结合口袋改造的研究 | 第22页 |
| 1.5 研究目的和意义及研究策略 | 第22-24页 |
| 1.5.1 研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 1.5.2 研究策略 | 第23-24页 |
| 1.6 研究框架 | 第24-25页 |
| 第2章 2,4-二氯苯酚羟化酶(TfdB-JLU)的同源模建及模型评估 | 第25-34页 |
| 2.1 前言 | 第25页 |
| 2.2 实验软件 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-27页 |
| 2.3.1 TfdB-JLU同源模建 | 第25-26页 |
| 2.3.2 TfdB-JLU三维结构同源模建后的评估 | 第26页 |
| 2.3.3 TfdB-JLU与选择的底物进行分子对接 | 第26-27页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第27-32页 |
| 2.4.1 同源模建 | 第27-30页 |
| 2.4.2 同源模建的评估 | 第30-32页 |
| 2.4.3 分子对接 | 第32页 |
| 2.5 本章小结 | 第32-34页 |
| 第3章 2,4-二氯苯酚羟化酶(TfdB-JLU)活性中心区域的改造提高酶的催化活性 | 第34-52页 |
| 3.1 前言 | 第34页 |
| 3.2 实验材料 | 第34-37页 |
| 3.2.1 实验主要试剂及菌种 | 第34-35页 |
| 3.2.2 实验主要仪器 | 第35页 |
| 3.2.3 实验软件 | 第35页 |
| 3.2.4 实验主要溶液及培养基配制 | 第35-37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-43页 |
| 3.3.1 酶催化活性相关的氨基酸靶标位点的确定 | 第37-38页 |
| 3.3.2 TfdB-JLU中心区域半理性突变设计及突变体构建表达 | 第38-41页 |
| 3.3.3 野生型与突变体菌株酶活及酶动力学表征 | 第41-43页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第43-51页 |
| 3.4.1 酶催化活性相关的氨基酸靶标位点的确定 | 第43-45页 |
| 3.4.2 TfdB-JLU中心区域半理性突变设计及突变体构建表达 | 第45-48页 |
| 3.4.3 突变体库的筛选及突变体酶动力学表征 | 第48-51页 |
| 3.5 本章小结 | 第51-52页 |
| 第4章 2,4-二氯苯酚羟化酶(TfdB-JLU)活性中心区域的改造改变酶的底物非专一性 | 第52-66页 |
| 4.1 前言 | 第52页 |
| 4.2 实验材料 | 第52-53页 |
| 4.2.1 主要试剂 | 第52-53页 |
| 4.2.2 主要软件 | 第53页 |
| 4.3 实验方法 | 第53-54页 |
| 4.3.1 酶底物非专一性氨基酸靶标位点的确定 | 第53页 |
| 4.3.2 突变体半理性设计及突变体构建表达 | 第53页 |
| 4.3.3 酶底物非专一性相关的突变体的筛选及酶活测定 | 第53页 |
| 4.3.4 野生酶与筛选得到的突变体的两者结构对比 | 第53页 |
| 4.3.5 TfdB-JLU活性中心底物结合口袋的研究 | 第53-54页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第54-64页 |
| 4.4.1 酶底物非专一性氨基酸靶标位点的确定 | 第54-55页 |
| 4.4.2 突变体半理性设计及突变体构建表达 | 第55页 |
| 4.4.3 酶底物非专一性相关的突变体的筛选及酶活测定 | 第55-58页 |
| 4.4.4 野生酶与筛选得到的突变体的两者结构对比 | 第58-60页 |
| 4.4.5 TfdB-JLU活性中心底物结合口袋的研究 | 第60-64页 |
| 4.5 本章小结 | 第64-66页 |
| 第5章 结论与展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-74页 |
| 硕士期间成果及发表论文 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75页 |
