| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 中英文缩略词对照表 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1.1 肝脏细胞的种类 | 第13页 |
| 1.2 肝再生的研究进展 | 第13-16页 |
| 1.2.1 肝再生模型 | 第14-15页 |
| 1.2.2 肝再生的分子机制 | 第15-16页 |
| 1.3 SPINK3的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.3.1 SPINK1/SPINK3的结构和功能 | 第16-17页 |
| 1.3.2 SPINK1/SPINK3与胰腺炎 | 第17页 |
| 1.3.3 SPINK1/SPINK3与肝癌以及其他癌症 | 第17-18页 |
| 1.3.4 SPINK3与肝再生 | 第18页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第18-19页 |
| 1.5 研究方案 | 第19-21页 |
| 第二章 SPINK3调控原代大鼠正常肝细胞增殖的分子机理 | 第21-47页 |
| 2.1 引言 | 第21-22页 |
| 2.2 实验材料和试剂 | 第22-25页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第22页 |
| 2.2.2 主要耗材 | 第22页 |
| 2.2.3 试剂与配制 | 第22-25页 |
| 2.2.4 菌株、质粒和细胞株来源 | 第25页 |
| 2.3 实验方法 | 第25-36页 |
| 2.3.1 原位灌流法分离原代大鼠肝细胞 | 第25-26页 |
| 2.3.2 感受态大肠杆菌的制备 | 第26页 |
| 2.3.3 质粒转化 | 第26-27页 |
| 2.3.4 质粒小量提取 | 第27-28页 |
| 2.3.5 质粒鉴定 | 第28页 |
| 2.3.6 碱裂解法大量提取质粒 | 第28-29页 |
| 2.3.7 腺病毒的包装 | 第29-30页 |
| 2.3.8 腺病毒的收集 | 第30页 |
| 2.3.9 腺病毒侵染原代大鼠肝细胞 | 第30页 |
| 2.3.10 阳性单克隆筛选、扩大培养和鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3.11 干涉片段的筛选 | 第31页 |
| 2.3.12 CCK8检测细胞活力 | 第31-32页 |
| 2.3.13 Ki67免疫荧光法检测细胞增殖 | 第32页 |
| 2.3.14 PI单染法检测细胞周期 | 第32页 |
| 2.3.15 PEAnnexinⅤ和7-AAD双染法检测细胞凋亡 | 第32-33页 |
| 2.3.16 qRT-PCR法检测基因表达情况 | 第33-34页 |
| 2.3.17 WesternBlot法检测蛋白表达情况 | 第34-35页 |
| 2.3.18 统计学分析 | 第35-36页 |
| 2.4 实验结果 | 第36-44页 |
| 2.4.1 SPINK3/EGFR信号通路网络 | 第36页 |
| 2.4.2 SPINK3过表达载体质粒的鉴定 | 第36-38页 |
| 2.4.3 SPINK3过表达及干扰效率鉴定 | 第38-39页 |
| 2.4.4 CCK8检测细胞活力 | 第39-40页 |
| 2.4.5 SPINK3表达变化对原代大鼠肝细胞增殖情况的影响 | 第40-41页 |
| 2.4.6 SPINK3表达变化对原代大鼠肝细胞的细胞周期的影响 | 第41-43页 |
| 2.4.7 SPINK3表达变化对原代大鼠肝细胞的细胞凋亡的影响 | 第43-44页 |
| 2.4.8 SPINK3表达变化对原代大鼠肝细胞中SPINK3信号通路相关基因表达的影响 | 第44页 |
| 2.5 讨论 | 第44-47页 |
| 第三章 rrSPINK3调控大鼠正常肝细胞BRL-3A和肝癌细胞RH-35增殖的分子机理 | 第47-61页 |
| 3.1 引言 | 第47页 |
| 3.2 实验材料和试剂 | 第47-48页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第47-48页 |
| 3.2.2 主要试剂及配置 | 第48页 |
| 3.3 实验方法 | 第48-51页 |
| 3.3.1 BRL-3A细胞系和RH-35细胞系的培养 | 第48-49页 |
| 3.3.2 MTT法检测细胞活力 | 第49页 |
| 3.3.3 EdU法检测细胞增殖 | 第49-50页 |
| 3.3.4 PI单染法检测细胞周期 | 第50页 |
| 3.3.5 PEAnnexinⅤ和7-AAD双染法检测细胞凋亡 | 第50-51页 |
| 3.3.6 qRT-PCR检测基因表达情况 | 第51页 |
| 3.3.7 WesternBlot检测蛋白表达情况 | 第51页 |
| 3.3.8 统计学分析 | 第51页 |
| 3.4 实验结果 | 第51-58页 |
| 3.4.1 rrSPINK3对BRL-3A细胞和RH-35细胞活力的影响 | 第51-53页 |
| 3.4.2 rrSPINK3对BRL-3A细胞和RH-35细胞增殖的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.3 rrSPINK3对BRL-3A细胞和RH-35细胞周期的影响 | 第54-55页 |
| 3.4.4 rrSPINK3对BRL-3A细胞和RH-35细胞凋亡的影响 | 第55-57页 |
| 3.4.5 rrSPINK3对BRL-3A细胞和RH-35细胞中SPINK3信号通路相关基因和蛋白表达的影响 | 第57-58页 |
| 3.5 讨论 | 第58-61页 |
| 结论 | 第61-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 攻读硕士学位期间参加的科研项目和发表论文 | 第69-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
