| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 缩略语表 | 第13-15页 |
| 第一章 综述：circRNA的生物学作用研究进展 | 第15-33页 |
| 1.1 circRNA的发现 | 第15-16页 |
| 1.2 circRNA的生成机制 | 第16-18页 |
| 1.3 circRNA的特性 | 第18-19页 |
| 1.4 circRNA的功能 | 第19-24页 |
| 1.4.1 circRNA可作为miRNA海绵发挥功能 | 第19-21页 |
| 1.4.2 circRNA与蛋白相互作用 | 第21-22页 |
| 1.4.3 circRNA可合成多肽 | 第22-23页 |
| 1.4.4 融合circRNA的发现 | 第23页 |
| 1.4.5 调节基因转录水平和剪接过程 | 第23-24页 |
| 1.5 研究的目的、意义和内容 | 第24-27页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第24页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第24页 |
| 1.5.3 研究内容 | 第24-27页 |
| 参考文献 | 第27-33页 |
| 第二章 大鼠肝再生早期关键circRNA的分析和筛选 | 第33-51页 |
| 2.1 引言 | 第33-34页 |
| 2.2 实验材料 | 第34页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第34页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-37页 |
| 2.3.1 制备大鼠肝再生模型 | 第34页 |
| 2.3.2 大鼠肝再生早期相关circRNA高通量测序 | 第34-35页 |
| 2.3.3 circRNA来源基因注解和circRNA差异表达转录本分析 | 第35页 |
| 2.3.4 大鼠肝再生早期关键circRNA的筛选标准 | 第35-36页 |
| 2.3.5 RNaseR消化 | 第36页 |
| 2.3.6 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测 | 第36-37页 |
| 2.4 实验结果 | 第37-45页 |
| 2.4.1 高通量测序结果分析 | 第37-38页 |
| 2.4.2 circRNA来源基因注解和差异表达转录本分析结果 | 第38-40页 |
| 2.4.3 大鼠肝再生关键circRNA的筛选结果 | 第40-42页 |
| 2.4.4 鉴定circRNA在大鼠肝再生中的表达 | 第42-43页 |
| 2.4.5 qRT-PCR检测circRNA在肝再生中的表达变化 | 第43-45页 |
| 2.5 讨论 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 第三章 circ137对大鼠BRL-3A细胞增殖的调节作用研究 | 第51-79页 |
| 3.1 引言 | 第51页 |
| 3.2 实验材料 | 第51-54页 |
| 3.2.1 主要仪器及耗材 | 第51-52页 |
| 3.2.2 主要试剂及溶液配制 | 第52-54页 |
| 3.3 实验方法 | 第54-65页 |
| 3.3.1 大鼠正常肝细胞株BRL-3A的培养 | 第54-55页 |
| 3.3.2 制备感受态大肠杆菌 | 第55-56页 |
| 3.3.3 质粒扩大培养和小量提取 | 第56页 |
| 3.3.4 制备过表达质粒 | 第56-57页 |
| 3.3.5 质粒转化 | 第57页 |
| 3.3.6 质粒鉴定 | 第57-58页 |
| 3.3.7 碱裂解法大量提取质粒 | 第58-59页 |
| 3.3.8 慢病毒包装、收集和侵染BRL-3A细胞 | 第59-61页 |
| 3.3.9 筛选、扩大培养阳性单克隆并鉴定 | 第61页 |
| 3.3.10 脂质体转染法干预BRL-3A细胞的circRNA表达水平 | 第61-62页 |
| 3.3.11 细胞活性检测：MTT法 | 第62页 |
| 3.3.12 细胞周期检测：PI单染法 | 第62-63页 |
| 3.3.13 qRT-PCR检测circRNA及相关基因表达情况 | 第63页 |
| 3.3.14 Westernblot检测相关蛋白表达情况 | 第63-64页 |
| 3.3.15 统计学分析 | 第64-65页 |
| 3.4 实验结果 | 第65-73页 |
| 3.4.1 circ137在大鼠正常肝细胞BRL-3A中的表达情况 | 第65页 |
| 3.4.2 酶切鉴定过表达质粒pLCDH-circ137 | 第65-66页 |
| 3.4.3 三种质粒共转染HEK293T细胞 | 第66-67页 |
| 3.4.4 空载或过表达载体pLCDH-circ137侵染BRL-3A细胞 | 第67-69页 |
| 3.4.5 qPCR检测过表达效率 | 第69-70页 |
| 3.4.6 减少circ137在BRL-3A细胞中的表达量 | 第70页 |
| 3.4.7 干预circ137对BRL-3A细胞活力的影响 | 第70-71页 |
| 3.4.8 干预circ137对BRL-3A细胞周期的影响 | 第71-72页 |
| 3.4.9 干预circ137对BRL-3A细胞周期、增殖或凋亡相关基因/蛋白的影响 | 第72-73页 |
| 3.5 讨论 | 第73-77页 |
| 参考文献 | 第77-79页 |
| 第四章 与circRNA结合的细胞增殖相关靶miRNA的筛选和检测 | 第79-91页 |
| 4.1 引言 | 第79页 |
| 4.2 实验材料 | 第79-80页 |
| 4.2.1 主要实验仪器 | 第79-80页 |
| 4.2.2 主要耗材 | 第80页 |
| 4.2.3 主要试剂及配制 | 第80页 |
| 4.3 试验方法 | 第80-81页 |
| 4.3.1 RNApulldown实验 | 第80-81页 |
| 4.3.2 qRT-PCR检测 | 第81页 |
| 4.4 实验结果 | 第81-86页 |
| 4.4.1 软件预测与circ137可能结合的miRNA | 第81-83页 |
| 4.4.2 qRT-PCR检测干预circRNA对细胞增殖相关靶miRNA表达的影响 | 第83-84页 |
| 4.4.3 检测circ137探针的作用 | 第84-85页 |
| 4.4.4 circ137的靶miRNA种类和功能分析 | 第85-86页 |
| 4.5 讨论 | 第86-89页 |
| 参考文献 | 第89-91页 |
| 结论 | 第91-93页 |
| 攻读硕士学位期间参加的科研项目和发表论文 | 第93-95页 |
| 致谢 | 第95-97页 |
