| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩略词 | 第14-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-27页 |
| 1.1 钙调素 | 第15-17页 |
| 1.1.1 钙调素的简介 | 第15页 |
| 1.1.2 Ca~(2+)激活钙调素的机制 | 第15-16页 |
| 1.1.3 钙调素的靶蛋白及其结合机制 | 第16页 |
| 1.1.4 靶蛋白中钙调素的结合序列 | 第16-17页 |
| 1.1.5 钙调素的生物学功能 | 第17页 |
| 1.2 钙调磷酸酶 | 第17-23页 |
| 1.2.1 钙调磷酸酶简介 | 第17-19页 |
| 1.2.2 钙调磷酸酶的催化调节 | 第19-21页 |
| 1.2.3 钙调磷酸酶的下游效应蛋白Crz1 | 第21-22页 |
| 1.2.4 钙调磷酸酶的生物学功能 | 第22-23页 |
| 1.3 钙调素与钙调磷酸酶结合位点的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.4 突变技术及其应用 | 第24-25页 |
| 1.4.1 突变技术简介 | 第24-25页 |
| 1.4.1.1 定点突变技术 | 第24页 |
| 1.4.1.2 非定点突变技术 | 第24-25页 |
| 1.4.2 突变技术应用 | 第25页 |
| 1.4.2.1 突变技术在蛋白质工程中的应用 | 第25页 |
| 1.4.2.2 DNA的缺失改造 | 第25页 |
| 1.5 Far-western blotting技术研究蛋白质间互作 | 第25-26页 |
| 1.6 本研究的目的及内容 | 第26-27页 |
| 第二章 钙调磷酸酶催化亚基基因的突变设计 | 第27-44页 |
| 前言 | 第27-28页 |
| 2.1 材料和方法 | 第28-34页 |
| 2.1.1 菌株与载体 | 第28页 |
| 2.1.2 培养基 | 第28-29页 |
| 2.1.3 酶与试剂 | 第29页 |
| 2.1.4 试剂的配制 | 第29-30页 |
| 2.1.5 总RNA的提取以及cDNA的合成 | 第30-31页 |
| 2.1.6 感受态的制备 | 第31页 |
| 2.1.7 钙调磷酸酶催化亚基基因的TA克隆 | 第31-33页 |
| 2.1.8 CNA基因原核表达载体的构建 | 第33页 |
| 2.1.9 基于PCR的定点突变方法 | 第33-34页 |
| 2.2 结果与分析 | 第34-42页 |
| 2.2.1 CNA基因原核表达载体的构建 | 第34-38页 |
| 2.2.2 CNA基因上CaM结合域及关键氨基酸残基的预测 | 第38页 |
| 2.2.3 CNA基因的突变设计 | 第38-39页 |
| 2.2.4 删除突变体基因的构建 | 第39-41页 |
| 2.2.5 定点突变体基因的构建 | 第41-42页 |
| 2.3 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 原核表达以及蛋白纯化 | 第44-53页 |
| 前言 | 第44页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-47页 |
| 3.1.1 研究材料和培养基 | 第44页 |
| 3.1.2 菌株与载体 | 第44页 |
| 3.1.3 酶与试剂 | 第44页 |
| 3.1.4 试剂的配制 | 第44-45页 |
| 3.1.5 SDS-PAGE步骤 | 第45-46页 |
| 3.1.6 原核表达载体的诱导表达 | 第46页 |
| 3.1.7 目的蛋白的纯化 | 第46-47页 |
| 3.2 结果与分析 | 第47-51页 |
| 3.2.1 CNA重组蛋白的表达纯化 | 第47-48页 |
| 3.2.2 重组突变蛋白的表达纯化 | 第48-51页 |
| 3.3 讨论 | 第51-53页 |
| 第四章 钙调磷酸酶的催化亚基上钙调素结合域及关键氨基酸的确定及其对钙调磷酸酶活性的影响 | 第53-59页 |
| 前言 | 第53页 |
| 4.1 材料与方法 | 第53-55页 |
| 4.1.1 研究材料和培养基 | 第53页 |
| 4.1.2 试剂 | 第53-54页 |
| 4.1.3 试剂的配制 | 第54页 |
| 4.1.4 Far-Western blotting检测 | 第54-55页 |
| 4.1.5 磷酸酶活力分析的方法 | 第55页 |
| 4.2 结果与分析 | 第55-57页 |
| 4.2.1 删除突变蛋白与CaM的互作 | 第55-56页 |
| 4.2.2 定点突变与CaM的互作 | 第56页 |
| 4.2.3 突变体与CNA酶活力的比较 | 第56-57页 |
| 4.3 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 总结和展望 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 附录A 攻读硕士期间发表的论文 | 第68页 |
