| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 中英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-44页 |
| 1.1 乳腺的研究进展 | 第12-17页 |
| 1.1.1 乳腺的发育 | 第12-14页 |
| 1.1.2 乳腺发育过程中重要调控因子 | 第14-17页 |
| 1.2 乳腺癌的研究进展 | 第17-32页 |
| 1.2.1 乳腺癌的类型 | 第17-20页 |
| 1.2.2 乳腺癌小鼠模型 | 第20-23页 |
| 1.2.3 乳腺癌相关信号通路 | 第23-27页 |
| 1.2.4 乳腺癌与干细胞 | 第27-30页 |
| 1.2.5 乳腺癌转移 | 第30-32页 |
| 1.3 microRNA | 第32-39页 |
| 1.3.1 microRNA的起源 | 第32页 |
| 1.3.2 miRNA的加工过程 | 第32-34页 |
| 1.3.3 miRNA在乳腺癌中的进展 | 第34-39页 |
| 1.4 miRNA-31的研究进展 | 第39-42页 |
| 1.4.1 miR-31的上游表达调控 | 第39-40页 |
| 1.4.2 miR-31与癌症 | 第40-41页 |
| 1.4.3 miR-31与过敏和自身免疫病 | 第41-42页 |
| 1.5 研究的目和意义 | 第42-44页 |
| 第二章 材料与方法 | 第44-70页 |
| 2.1 实验材料 | 第44-50页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第44页 |
| 2.1.2 实验动物 | 第44页 |
| 2.1.3 试剂及耗材 | 第44-46页 |
| 2.1.4 miR-31 mimics和miR-31 inhibitor及引物合成 | 第46页 |
| 2.1.5 载体及菌株 | 第46页 |
| 2.1.6 试剂配制 | 第46-49页 |
| 2.1.7 主要仪器设备 | 第49-50页 |
| 2.2 实验方法 | 第50-70页 |
| 2.2.1 制备转基因小鼠及实验鼠的获得 | 第50页 |
| 2.2.2 实验小鼠基因组的提取及基因型鉴定 | 第50-52页 |
| 2.2.3 乳腺癌小鼠全组织染色 | 第52页 |
| 2.2.4 蛋白质的提取及Western Blot检测 | 第52-55页 |
| 2.2.5 RNA的提取、反转录及定量PCR | 第55-58页 |
| 2.2.6 双荧光素酶报告基因载体构建以及相关实验 | 第58-61页 |
| 2.2.7 乳腺组织石蜡包埋块的制作 | 第61-62页 |
| 2.2.8 miR-31原位杂交 | 第62-63页 |
| 2.2.9 乳腺及乳腺肿瘤的H&E染色 | 第63-64页 |
| 2.2.10 免疫染色 | 第64页 |
| 2.2.11 乳腺肿瘤干细胞的分选 | 第64-65页 |
| 2.2.12 异种移植 | 第65页 |
| 2.2.13 3D培养实验 | 第65-66页 |
| 2.2.14 细胞划痕实验 | 第66页 |
| 2.2.15 细胞免疫荧光染色实验 | 第66页 |
| 2.2.16 ChIP实验(染色质免疫共沉淀技术) | 第66-69页 |
| 2.2.17 主要分析工具软件 | 第69-70页 |
| 第三章 结果与分析 | 第70-106页 |
| 3.1 miR-31在乳腺肿瘤中的表达情况 | 第70-73页 |
| 3.1.1 miR-31在人乳腺癌样本中的表达情况 | 第70-71页 |
| 3.1.2 miR-31在小鼠乳腺肿瘤中的表达情况 | 第71-73页 |
| 3.2 miR-31的敲除抑制肿瘤细胞增殖,促进分化,不影响凋亡 | 第73-80页 |
| 3.2.1 miR-31的敲除抑制乳腺原位瘤生长 | 第73-75页 |
| 3.2.2 miR-31的敲除抑制乳腺原位瘤的增殖 | 第75-77页 |
| 3.2.3 miR-31的敲除促进乳腺肿瘤细胞的分化 | 第77-79页 |
| 3.2.4 miR-31的敲除不影响乳腺肿瘤细胞的凋亡 | 第79-80页 |
| 3.3 miR-31的敲除抑制乳腺癌的进程 | 第80-83页 |
| 3.3.1 miR-31的敲除减慢了乳腺癌的进程 | 第80-82页 |
| 3.3.2 miR-31的敲除提高了乳腺癌小鼠的生存率 | 第82-83页 |
| 3.4 miR-31敲除导致乳腺肿瘤干细胞减少 | 第83-85页 |
| 3.4.1 miR-31的敲除导致乳腺肿瘤祖细胞减少 | 第83页 |
| 3.4.2 miR-31的敲除导致乳腺肿瘤干细胞减少 | 第83-84页 |
| 3.4.3 miR-31的敲除抑制肿瘤的起始能力 | 第84-85页 |
| 3.5 miR-31敲除抑制乳腺肿瘤细胞肺部转移 | 第85-88页 |
| 3.5.1 miR-31的敲除抑制乳腺癌小鼠肺转移 | 第85-87页 |
| 3.5.2 miR-31的敲除抑制体外乳腺癌细胞系肺转移 | 第87-88页 |
| 3.6 miR-31的敲除抑制上皮-间质细胞转化(EMT) | 第88-91页 |
| 3.6.1 miR-31的敲除抑制乳腺癌小鼠肿瘤细胞EMT过程 | 第88-91页 |
| 3.6.2 miR-31敲除抑制体外乳腺癌细胞EMT过程 | 第91页 |
| 3.7 miR-31的敲除抑制乳腺肿瘤细胞的迁移和侵袭能力 | 第91-94页 |
| 3.7.1 miR-31的敲除抑乳腺肿瘤细胞迁移能力 | 第91-92页 |
| 3.7.2 miR-31的敲除抑肿瘤细胞的侵袭能力 | 第92-94页 |
| 3.8 miR-31通过Wnt信号通路促进肿瘤细胞增殖 | 第94-98页 |
| 3.8.1 Wnt信号通路活性检测 | 第94-95页 |
| 3.8.2 miR-31靶向Wnt信号通路负调控因子 | 第95-98页 |
| 3.9 miR-31通过靶向细胞连接蛋白ITGA2促进乳腺肿瘤细胞转移 | 第98-100页 |
| 3.9.1 miR-31的敲除导致细胞连接紧密 | 第98-99页 |
| 3.9.2 miR-31靶向Itga2抑制肿瘤细胞转移 | 第99-100页 |
| 3.10 NF-κB信号通路介导了RANKL和AKT对miR-31的调控 | 第100-106页 |
| 3.10.1 NF-κB信号通路介导RANKL对miR-31的调控 | 第100-104页 |
| 3.10.2 NF-κB信号通路介导AKT对miR-31的调控 | 第104-106页 |
| 第四章 讨论 | 第106-109页 |
| 4.1 miR-31通过激活Wnt信号通路促进了乳腺肿瘤的增殖 | 第106-107页 |
| 4.2 miR-31促进了乳腺肿瘤中的EMT过程 | 第107页 |
| 4.3 miR-31通过靶向整合素蛋白调控了乳腺癌转移 | 第107-108页 |
| 4.4 AKT和RANK/RANKL信号参与调控了miR-31的表达 | 第108-109页 |
| 第五章 结论 | 第109-110页 |
| 参考文献 | 第110-124页 |
| 附录 引物序列 | 第124-126页 |
| 致谢 | 第126-127页 |
| 个人简历 | 第127页 |
