摘要 | 第2-4页 |
abstract | 第4-5页 |
引言 | 第8-10页 |
材料与方法 | 第10-24页 |
1.1 材料 | 第10-12页 |
1.1.1 实验细胞株来源 | 第10页 |
1.1.2 主要实验试剂 | 第10-11页 |
1.1.3 主要实验仪器 | 第11页 |
1.1.4 常用溶液配制方法 | 第11-12页 |
1.2 方法 | 第12-24页 |
1.2.1 细胞培养 | 第12-14页 |
1.2.2 细胞共培养体系构建 | 第14-16页 |
1.2.3 细胞增殖实验(CCK-8assay) | 第16页 |
1.2.4 细胞侵袭实验(Transwellassay) | 第16页 |
1.2.5 细胞迁移实验(woundhealing) | 第16-17页 |
1.2.6 实时荧光定量PCR | 第17-20页 |
1.2.6.1 细胞总RNA提取 | 第17页 |
1.2.6.2 RNA纯度及浓度检测 | 第17-18页 |
1.2.6.3 逆转录 | 第18-19页 |
1.2.6.4 RealTimeRCR反应 | 第19页 |
1.2.6.5 数据处理 | 第19-20页 |
1.2.7 蛋白质印迹(Westernblot) | 第20-22页 |
1.2.7.1 细胞总蛋白提取 | 第20页 |
1.2.7.2 BCA法蛋白浓度测定 | 第20页 |
1.2.7.3 制备SDS-PAGE凝胶 | 第20-21页 |
1.2.7.4 样品变性和电泳 | 第21页 |
1.2.7.5 转膜及检测 | 第21-22页 |
1.2.8 培养液中乳酸含量测定 | 第22页 |
1.2.9 靶向抑制MCT1和MCT4后细胞增殖情况 | 第22-23页 |
1.2.10 统计学处理 | 第23-24页 |
结果 | 第24-30页 |
2.1 共培养前后786-O和HUVEC增殖能力变化 | 第24页 |
2.2 共培养前后786-O和HUVEC侵袭能力变化 | 第24-25页 |
2.3 共培养前后786-O和HUVEC迁移能力变化 | 第25-26页 |
2.4 RT-PCR法测786-O和HUVEC中MCT1、MCT4表达 | 第26-27页 |
2.5 Westernblot法测786-O和HUVEC中MCT1、MCT4表达 | 第27页 |
2.6 培养基乳酸浓度测定 | 第27-28页 |
2.7 加入抑制剂后细胞增殖能力变化 | 第28页 |
2.8 加入抑制剂后培养基乳酸浓度 | 第28-30页 |
讨论 | 第30-33页 |
结论 | 第33-34页 |
本研究的不足之处 | 第34-35页 |
参考文献 | 第35-37页 |
综述 | 第37-44页 |
参考文献 | 第41-44页 |
攻读硕士期间研究成果 | 第44-45页 |
致谢 | 第45-46页 |