| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文名词缩写表 | 第14-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-25页 |
| 1.1 L-酪氨酸的理化性质及作用 | 第15页 |
| 1.2 代谢途径 | 第15-19页 |
| 1.3 生产方法 | 第19-21页 |
| 1.3.1 提取法 | 第19-20页 |
| 1.3.2 化学合成法 | 第20页 |
| 1.3.3 直接发酵法 | 第20-21页 |
| 1.3.4 基因重组法 | 第21页 |
| 1.4 MH4循环的简介 | 第21-22页 |
| 1.5 多巴(L-DOPA)简介 | 第22-23页 |
| 1.6 本论文研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 常规试验方法 | 第25-33页 |
| 2.1 实验仪器 | 第25页 |
| 2.2 实验试剂 | 第25-26页 |
| 2.3 培养基 | 第26页 |
| 2.4 质粒提取 | 第26-27页 |
| 2.5 PCR | 第27-28页 |
| 2.5.1 克隆PCR | 第27页 |
| 2.5.2 验证PCR | 第27-28页 |
| 2.6 酶切体系 | 第28页 |
| 2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第28-29页 |
| 2.8 DNA产物回收 | 第29-30页 |
| 2.8.1 液体回收 | 第29页 |
| 2.8.2 胶回收 | 第29-30页 |
| 2.9 连接和转化 | 第30-31页 |
| 2.9.1 化学转化法 | 第30-31页 |
| 2.9.2 电转化法 | 第31页 |
| 2.10 感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.10.1 感受态细胞的制备(化学法) | 第31页 |
| 2.10.2 感受态细胞的制备(电转法) | 第31-32页 |
| 2.11 目的蛋白的表达 | 第32页 |
| 2.12 OD_(600)测细胞浓度 | 第32-33页 |
| 第三章 通过苯丙氨酸羟化酶构建生产L-酪氨酸的基因工程菌 | 第33-45页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第33-34页 |
| 3.2.2 培养基 | 第34页 |
| 3.3 实验方法 | 第34-36页 |
| 3.3.1 质粒的构建 | 第34-35页 |
| 3.3.2 酶活分析 | 第35-36页 |
| 3.3.3 转化 | 第36页 |
| 3.3.4 L-酪氨酸的检测方法 | 第36页 |
| 3.4 实验结果 | 第36-43页 |
| 3.4.1 L-酪氨酸合成途径的设计 | 第36页 |
| 3.4.2 转化苯丙氨酸生成L-酪氨酸 | 第36-38页 |
| 3.4.3 L-酪氨酸合成途径的优化 | 第38-39页 |
| 3.4.4 pCS-AX及pCS-APTA-AX的构建 | 第39-40页 |
| 3.4.5 MH4循环的优化 | 第40-42页 |
| 3.4.6 发酵条件的优化 | 第42-43页 |
| 3.4.6.1 发酵温度的优化选择 | 第42-43页 |
| 3.4.6.2 发酵转速的优化选择 | 第43页 |
| 3.4.6.3 发酵培养基的优化选择 | 第43页 |
| 3.5 结果讨论及小结 | 第43-45页 |
| 第四章 对L-酪氨酸衍生物多巴(L-DOPA)的生产研究 | 第45-50页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 实验材料 | 第45页 |
| 4.2.1 实验菌株 | 第45页 |
| 4.2.2 培养基 | 第45页 |
| 4.3 实验方法 | 第45-47页 |
| 4.3.1 质粒的构建 | 第45-46页 |
| 4.3.2 转化 | 第46页 |
| 4.3.3 L-DOPA的检测方法 | 第46-47页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第47-48页 |
| 4.4.1 L-DOPA合成途径的设计 | 第47页 |
| 4.4.2 pSA-hpaBC质粒的构建 | 第47-48页 |
| 4.4.3 培养基中加入抗氧化物质 | 第48页 |
| 4.5 实验结果讨论及小结 | 第48-50页 |
| 第五章 结论与展望 | 第50-52页 |
| 5.1 结论与展望 | 第50-51页 |
| 5.2 创新点 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 研究成果及发表的学术论文 | 第56-57页 |
| 作者简介 | 第57页 |
| 导师简介 | 第57-58页 |
| 学位论文答辩委员会决议书 | 第58-59页 |
