| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-27页 |
| 1.1 植物 NAC 家族转录因子研究进展 | 第13-19页 |
| 1.1.1 NAC 转录因子的分类和结构特点 | 第13-14页 |
| 1.1.2 NAC 转录因子生物学功能 | 第14-17页 |
| 1.1.3 NAC 转录因子的表达调控 | 第17-19页 |
| 1.2 病毒诱导的基因沉默（VIGS ） | 第19-22页 |
| 1.2.1 VIGS 的分子机制 | 第19-20页 |
| 1.2.2 VIGS 在植物基因功能研究上的应用 | 第20-21页 |
| 1.2.3 VIGS 的特点 | 第21-22页 |
| 1.3 果实成熟衰老调控的相关研究 | 第22-25页 |
| 1.3.1 果实成熟的类型 | 第22页 |
| 1.3.2 乙烯对成熟衰老的调控 | 第22-25页 |
| 1.4 研究背景、目的及意义 | 第25页 |
| 1.5 研究主要内容及技术路线 | 第25-27页 |
| 第二章 番茄 NAC 家族转录因子的生物信息学分析 | 第27-46页 |
| 2.1 实验方法 | 第27-28页 |
| 2.1.1 番茄 NAC 转录因子的搜索 | 第27页 |
| 2.1.2 系统进化分析和序列比对 | 第27页 |
| 2.1.3 番茄 NAC 基因及编码蛋白序列分析 | 第27-28页 |
| 2.1.4 番茄 NAC 基因的表达特异性分析 | 第28页 |
| 2.2 结果与分析 | 第28-44页 |
| 2.2.1 NAC 转录因子的搜索 | 第28-29页 |
| 2.2.2 系统进化分析及多重序列比对 | 第29-33页 |
| 2.2.3 番茄 NAC 基因的结构分析 | 第33-36页 |
| 2.2.4 番茄 NAC 蛋白的理化性质和结构分析 | 第36-41页 |
| 2.2.5 番茄 NAC 蛋白高级结构预测 | 第41-42页 |
| 2.2.6 番茄 NAC 基因数字表达谱分析 | 第42-44页 |
| 2.3 本章小结 | 第44-46页 |
| 第三章 NAC 目的基因的克隆与表达分析 | 第46-67页 |
| 3.1 实验材料 | 第46-48页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第46页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第46页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第46-47页 |
| 3.1.4 实验器具处理 | 第47页 |
| 3.1.5 试剂配制 | 第47-48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-52页 |
| 3.2.1 总 RNA 提取 | 第48页 |
| 3.2.2 RNA 的消化 | 第48-49页 |
| 3.2.3 RNA 质量检测 | 第49页 |
| 3.2.4 cDNA 第一链的合成 | 第49-50页 |
| 3.2.5 引物的设计与合成 | 第50页 |
| 3.2.6 PCR 扩增反应 | 第50-51页 |
| 3.2.7 PCR 扩增产物回收测序 | 第51页 |
| 3.2.8 实时荧光定量 PCR | 第51-52页 |
| 3.2.9 药剂处理 | 第52页 |
| 3.2.10 统计分析 | 第52页 |
| 3.3 结果与分析 | 第52-66页 |
| 3.3.1 番茄总 RNA 的检测 | 第52-53页 |
| 3.3.2 PCR 扩增目的基因 SNAC4-9 和 β-tublin | 第53-55页 |
| 3.3.3 SNAC4-9 在不同组织部位和发育进程中的表达 | 第55-57页 |
| 3.3.4 SNAC4-9 在不同成熟类型番茄果实中的表达 | 第57-60页 |
| 3.3.5 外源激素处理对 SNAC4-9 基因表达的调控模式 | 第60-65页 |
| 3.3.6 外源乙烯处理对 SNAC4-9 基因表达的调控模式 | 第65-66页 |
| 3.4 本章小结 | 第66-67页 |
| 第四章 应用 VIGS 技术沉默番茄 SNAC 基因 | 第67-90页 |
| 4.1 实验材料 | 第67-70页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第67-68页 |
| 4.1.2 菌株 | 第68页 |
| 4.1.3 酶与生化试剂 | 第68页 |
| 4.1.4 常用试剂配置 | 第68-69页 |
| 4.1.5 主要仪器设备 | 第69-70页 |
| 4.2 实验方法 | 第70-77页 |
| 4.2.1 两端带有酶切位点的 SNAC4-9 基因的获得 | 第70-71页 |
| 4.2.2 PCR 扩增反应 | 第71页 |
| 4.2.3 目的片段 DNA 的回收 | 第71-72页 |
| 4.2.4 DNA 回收片段与 pTG19-T 载体的重组连接 | 第72页 |
| 4.2.5 大肠杆菌 DH5α 的转化 | 第72-73页 |
| 4.2.6 质粒提取 | 第73-74页 |
| 4.2.7 质粒 DNA 双酶切验证 | 第74页 |
| 4.2.8 pTRV2 重组载体的构建 | 第74-75页 |
| 4.2.9 表达载体转化农杆菌 | 第75-76页 |
| 4.2.10 农杆菌侵染液的制备 | 第76页 |
| 4.2.11 侵染农杆菌 | 第76页 |
| 4.2.12 基因表达分析 | 第76-77页 |
| 4.2.13 统计分析 | 第77页 |
| 4.3 结果与分析 | 第77-89页 |
| 4.3.1 目的基因片段回收纯化 | 第77-78页 |
| 4.3.2 重组 T 载体的阳性筛选及测序分析 | 第78-79页 |
| 4.3.3 重组 T 载体质粒的双酶切鉴定和片段回收 | 第79-81页 |
| 4.3.4 大肠杆菌中 TRV2 的双酶切鉴定和片段回收 | 第81页 |
| 4.3.5 重组载体的阳性筛选及测序分析 | 第81-83页 |
| 4.3.6 重组载体转化农杆菌结果分析 | 第83页 |
| 4.3.7 番茄果实基因沉默表型分析 | 第83-84页 |
| 4.3.8 乙烯相关基因片段的 PCR 扩增 | 第84-85页 |
| 4.3.9 VIGS 沉默番茄果实相应基因表达量分析 | 第85-86页 |
| 4.3.10 SNAC4 沉默的 VIGS 番茄果实基因表达量分析 | 第86页 |
| 4.3.11 SNAC5 沉默的 VIGS 番茄果实中基因表达量的分析 | 第86-87页 |
| 4.3.12 SNAC6 沉默的 VIGS 番茄果实中基因表达量的分析 | 第87-88页 |
| 4.3.13 SNAC7 沉默的 VIGS 番茄果实中基因表达量的分析 | 第88页 |
| 4.3.14 SNAC9 沉默的 VIGS 番茄果实中基因表达量的分析 | 第88-89页 |
| 4.4 本章小结 | 第89-90页 |
| 第五章 讨论 | 第90-98页 |
| 5.1 生物信息学分析与功能预测 | 第90-92页 |
| 5.2 SNAC4-9 基因在不同组织器官中的表达 | 第92-93页 |
| 5.3 SNAC4-9 基因在不同成熟类型番茄果实发育中的表达 | 第93-94页 |
| 5.4 植物激素对 SNAC 基因表达的调控模式 | 第94-96页 |
| 5.5 利用 VIGS 技术研究 SNAC 转录因子生物功能 | 第96-98页 |
| 第六章 全文结论和展望 | 第98-100页 |
| 6.1 结论 | 第98页 |
| 6.2 展望 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-109页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第109-110页 |
| 致谢 | 第110-112页 |
