| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-6页 |
| 符号说明 | 第10-12页 |
| 文献综述 | 第12-18页 |
| 研究内容一 家禽细胞中Wnt/β-catenin信号通路的基础活化状态的比较 | 第18-25页 |
| 1 材料 | 第18-19页 |
| 1.1 主要试剂 | 第18页 |
| 1.2 主要仪器 | 第18页 |
| 1.3 生物材料 | 第18-19页 |
| 2 方法 | 第19-21页 |
| 2.1 CEF、CEK、DF1、LMH、MSB1、DT40细胞的培养 | 第19页 |
| 2.2 试验设计 | 第19页 |
| 2.3 间接免疫荧光测定CEF、CEK、DF1、LMH、MSB1、DT40细胞中β-catenin蛋白的定位情况 | 第19-20页 |
| 2.4 BCA法测定细胞蛋白浓度 | 第20页 |
| 2.5 western blot测定CEF、CEK、DF1、LMH细胞中β-catenin蛋白的表达情况 | 第20页 |
| 2.6 荧光定量PCR测定CEF、CEK、DF1、LMH细胞中Wnt/β-catenin信号通路中关键靶基因水平 | 第20-21页 |
| 2.7 Wnt/β-catenin信号通路相关基因荧光定量PCR引物序列 | 第21页 |
| 2.8 荧光定量PCR检测各细胞中Wnt/β-catenin信号通路相关因子水平 | 第21页 |
| 3 结果 | 第21-24页 |
| 3.1 间接免疫荧光测定CEF、CEK、DF1、LMH、MSB1、DT40细胞中β-catenin蛋白的定位 | 第21-23页 |
| 3.2 western blot测定CEF、CEK、DF1、LMH细胞中β-catenin蛋白的表达 | 第23页 |
| 3.3 荧光定量PCR测定CEF、CEK、DF1、LMH细胞中Wnt/β-catenin信号通路中关键靶基因水平 | 第23-24页 |
| 4 讨论 | 第24-25页 |
| 研究内容二 J亚群禽白血病病毒激活CEF细胞中Wnt/β-catenin信号通路以及干扰β-catenin表达对病毒复制的影响 | 第25-33页 |
| 1 材料 | 第25页 |
| 1.1 主要试剂 | 第25页 |
| 1.2 主要仪器 | 第25页 |
| 1.3 生物材料 | 第25页 |
| 2 方法 | 第25-28页 |
| 2.1 J亚群禽白血病病毒(JS09 GY7)毒株的扩增 | 第25-26页 |
| 2.2 GY7病毒的TCID_(50)的测定 | 第26页 |
| 2.3 ALV-J激活CEF细胞中Wnt/β-catenin信号通路的研究 | 第26-27页 |
| 2.3.1 荧光素酶试验检测不同滴度ALV-J感染CEF细胞后TOP-Flash荧光素酶的表达 | 第26页 |
| 2.3.2 ALV-J感染CEF细胞后信号通路相关基因的荧光定量2.3PCR检测 | 第26页 |
| 2.3.3 Wnt/β-catenin信号通路相关基因荧光定量PCR引物序列 | 第26-27页 |
| 2.3.4 荧光定量PCR检测不同滴度病毒感染CEF细胞不同时间点Wnt/β-catenin信号通路相关因子水平 | 第27页 |
| 2.4 β-catenin siRNA对ALV-J在CEF细胞中复制的影响 | 第27-28页 |
| 2.4.1 β-catenin siRNA的合成与检验 | 第27页 |
| 2.4.2 β-catenin siRNA转染CEF细胞 | 第27-28页 |
| 2.4.3 western blot检测siRNA的干扰能力 | 第28页 |
| 2.4.4 β-catenin siRNA对ALV-J在CEF细胞中复制的影响 | 第28页 |
| 2.4.5 ALV-J在不同细胞中复制水平的测定 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-31页 |
| 3.1 高滴度ALV-J诱导CEF细胞中TOP-Flash荧光素酶显著性升高 | 第28-29页 |
| 3.2 高滴度ALV-J引起CEF细胞中Wnt信号通路转录因子LEF显著性升高 | 第29-30页 |
| 3.3 β-catenin siRNA检验效果 | 第30页 |
| 3.4 β-catenin siRNA抑制ALV-J在CEF细胞中的复制 | 第30-31页 |
| 3.5 ALV-J在CEF、CEK、DF1、LMH细胞中复制水平的比较 | 第31页 |
| 4 讨论 | 第31-33页 |
| 研究内容三 激活CEF细胞中Wnt/β-catenin信号通路检测J亚群禽白血病病毒复制的情况 | 第33-42页 |
| 1 材料 | 第33-34页 |
| 1.1 主要试剂 | 第33页 |
| 1.2 主要仪器 | 第33页 |
| 1.3 生物材料 | 第33-34页 |
| 2 方法 | 第34-35页 |
| 2.1 LiCl对ALV-J在CEF细胞中复制的影响 | 第34-35页 |
| 2.1.1 LiCl、GSK-3β抑制剂、JW-74的细胞毒性试验 | 第34页 |
| 2.1.2 LiCl抑制ALV-J在CEF细胞中的复制 | 第34页 |
| 2.1.3 荧光定量PCR、western blot与激光共聚焦检测病毒的复制 | 第34页 |
| 2.1.4 LiCl抑制病毒复制阶段的研究 | 第34页 |
| 2.1.5 LiCl对病毒吸附和侵入的影响 | 第34-35页 |
| 2.1.6 LiCl抑制ALV-J诱导的炎症反应及其作用机制的研究 | 第35页 |
| 2.2 Wntβ-catenin信号通路与LiCl抗病毒效果的研究 | 第35页 |
| 2.2.1 LiCl刺激CEF细胞后TOP-Flash荧光素酶的检测 | 第35页 |
| 3 结果 | 第35-40页 |
| 3.1 LiCl、GSK-3β抑制剂、JW-74的细胞毒性试验结果 | 第35页 |
| 3.2 LiCl抑制ALV-J囊膜蛋白和衣壳蛋白的表达 | 第35-36页 |
| 3.3 不同时间点加入LiCl对ALV-J复制效果有影响 | 第36-37页 |
| 3.4 LiCl不影响病毒的吸附和侵入 | 第37-38页 |
| 3.5 LiCl抑制ALV-J感染72h后的CEF细胞中IL-6、IL-8、IL-1β以及TNF-α的上调水平 | 第38页 |
| 3.6 LiCl与GSK-3β抑制剂诱导TOP-Flash荧光素酶升高 | 第38-39页 |
| 3.7 Wnt/β-catenin信号通路抑制剂JW-74恢复部分LiCl抗病毒效果 | 第39页 |
| 3.8 Wnt/β-catenin信号通路激活剂GSK-3β抑制剂促进ALV-J在CEF细胞中的复制 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 全文小结 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 硕士期间发表论文 | 第48-49页 |
