缩略语表 | 第7-9页 |
中文摘要 | 第9-13页 |
Abstract | 第13-17页 |
前言 | 第18-19页 |
文献回顾 | 第19-31页 |
1. 骨质疏松与骨质疏松的治疗 | 第19-24页 |
2. 骨质疏松与肠道激素的关系 | 第24-27页 |
3. 骨质疏松与间充质干细胞分化 | 第27-28页 |
4. WNT 信号通路与 BMSCS 成骨分化密切相关 | 第28-31页 |
第一部分 EXENDIN-4 对大鼠老龄性骨质疏松的治疗作用 | 第31-45页 |
1 材料 | 第32页 |
1.1 动物 | 第32页 |
1.2 试剂 | 第32页 |
1.3 仪器设备 | 第32页 |
2 方法 | 第32-35页 |
2.1 实验分组及样本收集处理 | 第32-33页 |
2.2 Micro-CT 分析 | 第33页 |
2.3 生物力学特性分析 | 第33页 |
2.4 骨代谢生化指标检测 | 第33-34页 |
2.5 骨组织形态计量学指标测定 | 第34-35页 |
2.6 统计学处理 | 第35页 |
3 结果 | 第35-42页 |
3.1 Exendin-4 改善老龄大鼠骨小梁微结构 | 第35-37页 |
3.2 Exendin-4 增强股骨的机械强度 | 第37-38页 |
3.3 Exendin-4 减少老龄大鼠尿液中钙磷流失,升高血清中 BAP 和 OCN 水平 | 第38-40页 |
3.4 Exendin-4 提高老龄大鼠骨形成率(BFR)和骨矿化率(MAR) | 第40-41页 |
3.5 Exendin-4 增加老龄大鼠骨髓中成骨细胞数量并减少脂肪细胞数量 | 第41-42页 |
4 讨论 | 第42-45页 |
第二部分 EXENDIN-4 对 BMSCS 增殖分化的影响 | 第45-64页 |
1 材料 | 第45-48页 |
1.1 动物 | 第45页 |
1.2 器材 | 第45-46页 |
1.3 试剂 | 第46-47页 |
1.4 试剂的配制 | 第47-48页 |
1.5 仪器设备 | 第48页 |
2 方法 | 第48-55页 |
2.1 间充质干细胞的分离培养及纯化 | 第48-49页 |
2.2 间充质干细胞的鉴定 | 第49页 |
2.3 细胞免疫荧光检测 | 第49页 |
2.4 BMSCs 增殖检测 | 第49-50页 |
2.5 诱导分化培养基的配制 | 第50页 |
2.6 ALP 染色 | 第50页 |
2.7 茜素红染色 | 第50-51页 |
2.8 油红 O 染色 | 第51-52页 |
2.9 RNA 的提取 | 第52页 |
2.10 浓度检测 | 第52页 |
2.11 逆转录 | 第52-53页 |
2.12 PCR 扩增 | 第53页 |
2.13 琼脂糖凝胶电泳 | 第53页 |
2.14 蛋白样品的准备 | 第53-54页 |
2.15 分离胶的配制 | 第54页 |
2.16 浓缩胶的配制 | 第54页 |
2.17 Western blot | 第54-55页 |
2.18 统计学处理 | 第55页 |
3 结果 | 第55-61页 |
3.1 流式细胞仪鉴定间充质干细胞 | 第55-56页 |
3.2 BMSCs 成骨分化和成脂分化 | 第56-57页 |
3.3 Exendin-4 剂量依赖性促进 BMSCs 增殖 | 第57-58页 |
3.4 间充质干细胞表达 GLP-1 受体 | 第58-59页 |
3.5 Exendin-4 促进成骨分化,抑制成脂分化 | 第59-60页 |
3.6 Exendin-4 促进成骨分化基因的表达,抑制成脂分化基因的表达 | 第60-61页 |
4 讨论 | 第61-64页 |
第三部分 GLP-1 受体信号通路在 BMSCS 分化中的调控作用及分子机制 | 第64-73页 |
1 材料 | 第64-65页 |
1.1 细胞 | 第64页 |
1.2 试剂 | 第64-65页 |
1.3 器材 | 第65页 |
2 方法 | 第65-67页 |
2.1 GLP-1R-shRNA 慢病毒表达载体的构建与鉴定 | 第65页 |
2.2 核蛋白和胞浆蛋白的提取 | 第65-66页 |
2.3 Western Blot | 第66页 |
2.4 统计学处理 | 第66-67页 |
3 结果 | 第67-70页 |
3.1 构建 GLP-1R 基因沉默的细胞 | 第67-68页 |
3.2 Exendin-4 激活 Wnt 信号通路,引起β-catenin 转位入核 | 第68-69页 |
3.3 Exendin-4 通过 PKA 信号通路激活 Wnt 信号通路,调控细胞分化方向 | 第69-70页 |
4 讨论 | 第70-73页 |
小结 | 第73-74页 |
参考文献 | 第74-83页 |
个人简历和研究成果 | 第83-84页 |
致谢 | 第84页 |