| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-26页 |
| 1.1 核糖核酸酶 Barnase 及其抑制剂 Barstar | 第11-13页 |
| 1.2 植物花序分生组织 | 第13-15页 |
| 1.3 AtREM1 启动子 | 第15-16页 |
| 1.4 可控的化学诱导表达系统 | 第16-18页 |
| 1.5 基于 ACEI 的铜离子诱导表达系统 | 第18-20页 |
| 1.5.1 铜调控系统的构成 | 第19页 |
| 1.5.2 铜离子的外部施加方式和响应浓度 | 第19-20页 |
| 1.6 根癌农杆菌介导的外源基因转化体系 | 第20-22页 |
| 1.6.1 农杆菌介导法转化外源基因 | 第20-21页 |
| 1.6.2 农杆菌介导转化的双元载体系统 | 第21-22页 |
| 1.7 外源目的基因的检测技术 | 第22-24页 |
| 1.7.1 地高辛标记探针 Southern blot 检测外源基因技术 | 第22-23页 |
| 1.7.2 实时荧光定量 PCR 检测外源基因技术 | 第23-24页 |
| 1.8 研究的目的、意义 | 第24-26页 |
| 1.8.1 试验研究的内容和目的 | 第24-25页 |
| 1.8.2 本实验的研究意义及创新 | 第25-26页 |
| 2 植物营养生长保持基因系统及生殖器官重建基因系统的构建 | 第26-50页 |
| 2.1 材料、仪器和试剂 | 第26-31页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第26-27页 |
| 2.1.3 主要试剂及培养基配方 | 第27-30页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第30-31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-40页 |
| 2.2.1 植物生殖器官控制基因系统各基因组件的获取及验证 | 第31-38页 |
| 2.2.2 pMD20-BTg 质粒的获得 | 第38页 |
| 2.2.3 pMD19-AtREM1-3A 质粒的获得 | 第38-39页 |
| 2.2.4 pUC19-barnase 质粒的获得 | 第39页 |
| 2.2.5 pUC19-AtREM1P-barnase-3A 质粒的获得 | 第39页 |
| 2.2.6 种子植物营养生长保持基因系统（BTg-RBN）的构建 | 第39页 |
| 2.2.7 生殖器官重建基因系统的构建 | 第39-40页 |
| 2.3 实验技术路线 | 第40-41页 |
| 2.4 重组表达质粒示意图 | 第41页 |
| 2.5 根癌农杆菌介导的叶盘法转化无菌烟草 | 第41-43页 |
| 2.5.1 植物生殖器官控制基因系统转化农杆菌 | 第41-42页 |
| 2.5.2 农杆菌侵染无菌烟草 | 第42页 |
| 2.5.3 转基因烟草组培苗的移栽 | 第42-43页 |
| 2.6 转基因烟草的筛选及检测 | 第43-49页 |
| 2.6.1 转基因烟草基因组 DNA 的提取及目的基因的 PCR 扩增 | 第43页 |
| 2.6.2 转基因烟草的 southern blot 检测 | 第43-47页 |
| 2.6.3 实时荧光定量 PCR 检测转基因烟草目的基因 barnase | 第47-49页 |
| 2.7 铜离子诱导花发育受阻烟草有性繁殖 | 第49-50页 |
| 3 实验结果与分析 | 第50-64页 |
| 3.1 活化解淀粉芽孢杆菌并扩大培养 | 第50页 |
| 3.2 载体构建中各组件的测序分析 | 第50-54页 |
| 3.2.1 拟南芥 AtREM1 启动子的克隆 | 第50-51页 |
| 3.2.2 barnase 基因的克隆 | 第51页 |
| 3.2.3 豌豆 rbcs 3A 终止子的克隆 | 第51-52页 |
| 3.2.4 AtREM1 测序图 | 第52页 |
| 3.2.5 AtREM1 启动子测序结果与 NCBI 的比对 | 第52-54页 |
| 3.3 构建载体各步骤的酶切结果分析 | 第54-57页 |
| 3.4 转基因烟草植株的获得 | 第57-58页 |
| 3.4.1 农杆菌介导 RBCu 质粒转化 NC89 烟草 | 第57-58页 |
| 3.4.2 转基因烟草的培养 | 第58页 |
| 3.5 转基因烟草的检测鉴定 | 第58-63页 |
| 3.5.1 转基因烟草的普通 PCR 检测 | 第58-59页 |
| 3.5.2 转基因烟草的 southern blot 检测 | 第59-61页 |
| 3.5.3 转基因烟草的实时荧光定量 PCR 检测 | 第61-63页 |
| 3.6 铜离子诱导转基因烟草开花 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-67页 |
| 4.1 两套载体系统的构建 | 第64页 |
| 4.2 转基因植物的检测鉴定方法 | 第64-65页 |
| 4.3 铜离子诱导表达系统的可操作性 | 第65页 |
| 4.4 有待验证的问题 | 第65-66页 |
| 4.5 根癌农杆菌介导的稳定转染 | 第66-67页 |
| 5 展望 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 个人简历和研究成果 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
