| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 综述 | 第11-19页 |
| 1.1 氨氮废水处理 | 第11-13页 |
| 1.1.1 异养硝化细菌研究现状 | 第12页 |
| 1.1.2 异养硝化菌硝化影响因素 | 第12-13页 |
| 1.2 氨同化途径研究 | 第13-15页 |
| 1.2.1 丙氨酸脱氢酶(Ala DH) | 第13-14页 |
| 1.2.2 谷氨酸脱氢酶(GDH) | 第14页 |
| 1.2.3 谷氨酰胺合成酶(GS) | 第14-15页 |
| 1.3 丙氨酸脱氢酶研究现状 | 第15-17页 |
| 1.3.1 丙氨酸脱氢酶晶体结构 | 第15页 |
| 1.3.2 底物特异性 | 第15-16页 |
| 1.3.3 酶学参数 | 第16-17页 |
| 1.3.4 氨离子对丙氨酸脱氢酶酶活的影响 | 第17页 |
| 1.4 各种类型转录调节子及其调节机制 | 第17-19页 |
| 第二章 Arthrobacter ureafaciens CZ31氨氮降解条件优化 | 第19-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-22页 |
| 2.1.1 菌株与培养基 | 第19-20页 |
| 2.1.2 主要溶液配置 | 第20-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-25页 |
| 2.2.1 氨氮标准曲线制作 | 第22页 |
| 2.2.2 A. ureafaciens CZ31在M9培养基中生长曲线的绘制 | 第22页 |
| 2.2.3 培养时间对菌株降解氨氮的影响 | 第22-23页 |
| 2.2.4 初始氨氮浓度对菌株降解氨氮的影响 | 第23页 |
| 2.2.5 碳氮比对菌株降解氨氮的影响 | 第23页 |
| 2.2.6 接种量对菌株降解氨氮的影响 | 第23页 |
| 2.2.7 p H对菌株降解氨氮的影响 | 第23页 |
| 2.2.8 初始氨氮浓度对酶活力的影响 | 第23-24页 |
| 2.2.9 Ala DH和GDH活性电泳 | 第24-25页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第25-32页 |
| 2.3.1 氨氮含量标准曲线 | 第25页 |
| 2.3.2 A. ureafaciens CZ31在M9培养基的生长曲线 | 第25-26页 |
| 2.3.3 培养时间对菌株降解氨氮的影响 | 第26-27页 |
| 2.3.4 初始氨氮浓度对菌株降解氨氮的影响 | 第27-28页 |
| 2.3.5 碳氮比对菌株降解氨氮的影响 | 第28-29页 |
| 2.3.6 接种量对菌株氨氮降解影响 | 第29页 |
| 2.3.7 p H对菌株降解氨氮影响 | 第29-30页 |
| 2.3.8 初始氨氮浓度对酶活的影响 | 第30-31页 |
| 2.3.9 Ala DH、GDH、GS活性电泳 | 第31-32页 |
| 2.4 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 Arthrobacter ureafaciens CZ31丙氨酸脱氢酶的异源表达 | 第33-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-35页 |
| 3.1.1 菌株及质粒 | 第33页 |
| 3.1.2 培养基及主要溶液配置 | 第33-35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-42页 |
| 3.2.1 A. ureafaciens CZ31基因组DNA的提取 | 第35页 |
| 3.2.2 p ET-28a的提取 | 第35页 |
| 3.2.3 A. ureafaciens CZ31丙氨酸脱氢酶Auald基因的克隆 | 第35-36页 |
| 3.2.4 Auald生物信息学分析 | 第36页 |
| 3.2.5 表达质粒的构建及转化 | 第36-38页 |
| 3.2.6 A. ureafaciens CZ31丙氨酸脱氢酶基因Auald的诱导表达 | 第38页 |
| 3.2.7 重组蛋白的酶活检测 | 第38-40页 |
| 3.2.8 重组A. ureafaciens CZ31丙氨酸脱氢酶产酶条件的优化 | 第40-42页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第42-50页 |
| 3.3.1 A. ureafaciens CZ31丙氨酸脱氢酶基因Auald克隆 | 第42页 |
| 3.3.2 Auald生物信息学分析 | 第42-43页 |
| 3.3.3 重组质粒酶切鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.4 重组蛋白的诱导表达 | 第44-47页 |
| 3.3.5 响应面优化 | 第47-50页 |
| 3.4 小结 | 第50-51页 |
| 第四章 Arthrobacter ureafaciens CZ31丙氨酸脱氢酶酶学性质 | 第51-62页 |
| 4.1 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.1.1 菌株及培养基 | 第51页 |
| 4.1.2 主要溶液配置 | 第51-52页 |
| 4.2 实验方法 | 第52-55页 |
| 4.2.1 菌种活化 | 第52-53页 |
| 4.2.2 丙氨酸脱氢酶酶学性质研究 | 第53页 |
| 4.2.3 工程菌CZR07胞内粗酶液提取 | 第53页 |
| 4.2.4 重组Ala DH纯化 | 第53页 |
| 4.2.5 Ala DH最适p H | 第53页 |
| 4.2.6 Ala DH最适反应温度 | 第53-54页 |
| 4.2.7 Ala DH热稳定性 | 第54页 |
| 4.2.8 金属离子对Ala DH酶活影响 | 第54页 |
| 4.2.9 氨离子浓度对Ala DH酶活影响 | 第54页 |
| 4.2.10 puc R family transcription regulator克隆及序列分析 | 第54-55页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第55-61页 |
| 4.3.1 重组酶的镍柱纯化 | 第55-56页 |
| 4.3.2 重组酶最适温度 | 第56-57页 |
| 4.3.3 重组酶热稳定性研究 | 第57页 |
| 4.3.4 丙氨酸脱氢酶最适p H研究 | 第57-58页 |
| 4.3.5 金属离子对重组酶的影响 | 第58-59页 |
| 4.3.6 氨离子对重组酶的影响 | 第59页 |
| 4.3.7 puc R family transcription regulator测序及分析 | 第59-61页 |
| 4.4 小结 | 第61-62页 |
| 第五章 总结与展望 | 第62-63页 |
| 5.1 总结 | 第62页 |
| 5.2 展望 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 附录1 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第71-72页 |
| 附录2 攻读硕士学位期间参加的科研项目 | 第72页 |
