| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一篇 UbiG蛋白膜结合特性对CoQ合成氧甲基转移过程中甲基供体进入调控的研究 | 第12-52页 |
| 第1章 I型SAM-依赖的氧甲基转移酶UbiG蛋白的研究进展 | 第12-24页 |
| 1.1 辅酶Q的生物学功能概述 | 第12-14页 |
| 1.2 辅酶Q的生物合成途径 | 第14-19页 |
| 1.3 UbiG蛋白的功能及其在辅酶Q生物合成中的作用 | 第19-21页 |
| 1.4 UbiG蛋白的膜结合特性 | 第21页 |
| 1.5 UbiG蛋白的结构生物学研究进展 | 第21-24页 |
| 第2章 实验结果和讨论 | 第24-38页 |
| 2.1 UbiG蛋白及其突变体的克隆、表达与纯化 | 第24页 |
| 2.2 UbiG蛋白与膜脂结合对其与甲基供体亲和力的影响 | 第24-26页 |
| 2.3 UbiG蛋白膜结合区突变对其与甲基供体亲和力的影响 | 第26-28页 |
| 2.4 UbiG△~(165-187)-SAH复合物晶体初筛与优化 | 第28-29页 |
| 2.5 UbiG△~(165-187)-SAH复合物晶体数据收集处理与结构解析 | 第29-31页 |
| 2.6 UbiG△~(165-187)-SAH复合物的模型质量分析 | 第31-33页 |
| 2.7 UbiG△~(165-187)-SAH复合物的整体结构 | 第33-34页 |
| 2.8 UbiG蛋白的甲基供体结合模式与甲基转移机制 | 第34-38页 |
| 第3章 实验材料和方法 | 第38-44页 |
| 3.1 基因克隆,表达与纯化 | 第38-41页 |
| 3.1.1 UbiG蛋白突变体基因克隆及跑胶回收 | 第38-39页 |
| 3.1.2 限制性内切酶双酶切与载体连接 | 第39-40页 |
| 3.1.3 感受态细胞制备与转化 | 第40页 |
| 3.1.4 质粒抽提与PCR鉴定 | 第40-41页 |
| 3.1.5 UbiG与其突变体蛋白的表达纯化 | 第41页 |
| 3.2 结晶,数据收集与处理 | 第41-42页 |
| 3.3 结构解析与修正 | 第42页 |
| 3.4 脂质体制备 | 第42页 |
| 3.5 等温滴定量热(ITC)实验 | 第42-43页 |
| 3.6 甲基供体进入孔道分析 | 第43-44页 |
| 小结 | 第44-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 第二篇 新月柄杆菌SkgA蛋白的结构生物学研究 | 第52-78页 |
| 第一章 SkgA蛋白研究背景介绍 | 第52-60页 |
| 1.1 新月柄杆菌概述 | 第52-54页 |
| 1.2 新月柄杆菌的极性与细胞周期调控系统 | 第54-58页 |
| 1.3 SkgA蛋白在新月柄杆菌饥饿应答调控中的作用 | 第58页 |
| 1.4 依据序列结构信息对SkgA蛋白功能的推测 | 第58-60页 |
| 第二章 实验结果和讨论 | 第60-68页 |
| 2.1 目的基因获取与重组质粒构建 | 第60-61页 |
| 2.2 野生型SkgA与硒代甲硫氨酸SkgA蛋白的表达纯化 | 第61-63页 |
| 2.3 晶体生长与优化 | 第63-64页 |
| 2.4 衍射数据收集处理与结构解析尝试 | 第64-66页 |
| 2.5 硒代甲硫氨酸SkgA蛋白的结晶与数据收集 | 第66-68页 |
| 第三章 实验材料和方法 | 第68-75页 |
| 3.1 skgA基因的克隆与重组质粒的构建 | 第68-70页 |
| 3.1.1 引物设计与PCR扩增 | 第68-69页 |
| 3.1.2 核酸内切酶双酶切与载体连接 | 第69页 |
| 3.1.3 转化与质粒扩增 | 第69-70页 |
| 3.1.4 质粒提取与PCR鉴定 | 第70页 |
| 3.2 SkgA与硒代甲硫氨酸SkgA蛋白表达与纯化 | 第70-72页 |
| 3.2.1 表达鉴定 | 第70-71页 |
| 3.2.2 诱导表达与收集破碎 | 第71页 |
| 3.2.3 镍亲和层析 | 第71-72页 |
| 3.2.4 葡聚糖凝胶过滤层析 | 第72页 |
| 3.2.5 阴离子交换层析 | 第72页 |
| 3.3 晶体生长与优化 | 第72-73页 |
| 3.4 数据收集与处理 | 第73-75页 |
| 小结 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-78页 |
| 附录 | 第78-80页 |
| 致谢 | 第80-82页 |
| 在读期间发表的学术论文与取得的研究成果 | 第82页 |
