| 摘要 | 第4-6页 |
| Summary | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-26页 |
| 1 虹鳟的生物学特性 | 第13页 |
| 1.1 形态特征 | 第13页 |
| 1.2 生长环境 | 第13页 |
| 1.3 繁殖习性 | 第13页 |
| 2 热应激 | 第13-16页 |
| 2.1 热应激的概念 | 第14页 |
| 2.2 热休克蛋白与热应激 | 第14-16页 |
| 2.2.1 热休克蛋白简介 | 第14-15页 |
| 2.2.2 HSPA4L | 第15页 |
| 2.2.3 CRT | 第15-16页 |
| 3 miRNA简介 | 第16-24页 |
| 3.1 miRNA的概念 | 第16页 |
| 3.2 miRNA的发现 | 第16-17页 |
| 3.3 miRNA的命名规则 | 第17-18页 |
| 3.4 miRNA的生成及加工机制 | 第18页 |
| 3.5 miRNA作用模式 | 第18页 |
| 3.6 miRNA的生物学特征 | 第18-19页 |
| 3.6.1 高度保守性 | 第18-19页 |
| 3.6.2 时序表达特异性 | 第19页 |
| 3.6.3 组织表达特异性 | 第19页 |
| 3.7 miRNA与热应激的研究进展 | 第19-20页 |
| 3.8 miRNA靶基因的寻找及验证方法 | 第20-23页 |
| 3.8.1 生物信息学方法 | 第20-22页 |
| 3.8.2 实验法 | 第22-23页 |
| 3.9 双荧光素酶报告基因验证法原理与其优势 | 第23-24页 |
| 4 靶基因重组载体的构建方法 | 第24页 |
| 5 课题研究前期基础及本研究内容 | 第24-26页 |
| 第二章 双荧光素酶报告基因验证novel-434与HSPA4L、novel-242与CRT的靶标关系 | 第26-56页 |
| 1 材料 | 第26-29页 |
| 1.1 主要试剂与材料 | 第26-27页 |
| 1.2 主要仪器 | 第27页 |
| 1.3 试剂配置 | 第27-29页 |
| 1.3.1 琼脂糖凝胶电泳相关试剂配置 | 第27-28页 |
| 1.3.2 克隆相关试剂配置 | 第28页 |
| 1.3.3 转染相关试剂配置 | 第28-29页 |
| 2 试验方法 | 第29-44页 |
| 2.1 试验原理 | 第29页 |
| 2.2 靶基因3'-UTR及突变型3'-UTR设计与合成 | 第29-32页 |
| 2.3 pmirGLO-HSPA4L/CRT3'-UTR及其突变型载体的构建 | 第32-35页 |
| 2.3.1 pmirGLO载体的双酶切 | 第33页 |
| 2.3.2 酶切产物纯化回收 | 第33-35页 |
| 2.3.4 pmirGLO-mut-HSPA4L/CRT3'-UTR载体的构建 | 第35页 |
| 2.4 重组质粒转化感受态细胞 | 第35-36页 |
| 2.4.1 感受态细胞DH5α的制备 | 第35-36页 |
| 2.4.2 转化 | 第36页 |
| 2.5 重组质粒的抽提 | 第36-38页 |
| 2.5.1 重组载体质粒双酶切鉴定 | 第37-38页 |
| 2.5.2 重组质粒的测序鉴定及大量抽提 | 第38页 |
| 2.6 转染相关对照质粒及miRNAmimics的合成 | 第38-39页 |
| 2.7 细胞培养 | 第39-40页 |
| 2.7.1 细胞复苏 | 第39页 |
| 2.7.2 细胞换液 | 第39页 |
| 2.7.3 细胞传代及冻存 | 第39-40页 |
| 2.8 细胞转染及荧光活性检测 | 第40-44页 |
| 2.8.1 细胞转染效率评价 | 第40-42页 |
| 2.8.2 重组载体转染 | 第42-44页 |
| 2.8.3 双荧光素酶报告基因活性检测 | 第44页 |
| 2.8.4 试验数据处理 | 第44页 |
| 2.9 靶基因HSPA4LGO注释及KEGG富集分析 | 第44页 |
| 3.结果与分析 | 第44-52页 |
| 3.1 重组质粒转化感受态细胞后平板生长情况 | 第44-45页 |
| 3.2 重组质粒的双酶切及鉴定结果 | 第45-46页 |
| 3.3 重组质粒测序结果 | 第46-48页 |
| 3.4 重组质粒与miRNA转染浓度的确定 | 第48-50页 |
| 3.5 双荧光素酶活性检测结果 | 第50-52页 |
| 3.5.1 novel-434与HSPA4L组荧光活性检测 | 第50-51页 |
| 3.5.2 novel-242与CRT组荧光活性检测 | 第51-52页 |
| 3.6 靶基因HSPA4LGO注释及KEGG富集分析结果 | 第52页 |
| 4 讨论 | 第52-55页 |
| 4.1 影响293T细胞转染效率的试验因素 | 第52-53页 |
| 4.2 novel-434对HSPA4L基因表达的影响 | 第53页 |
| 4.3 novel-242对CRT基因表达的影响 | 第53-54页 |
| 4.4 novel-434与靶基因HSPA4L在内质网蛋白质加工通路中的调控机制 | 第54-55页 |
| 5 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简介 | 第62-63页 |
| 导师简介 | 第63-64页 |
