| 摘要 | 第7-8页 |
| Abstract | 第8页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-29页 |
| 1.1 Zwittermicin A和Kanosamine简介 | 第12-15页 |
| 1.1.1 Zwittermicin A和Kanosamine的发现 | 第12页 |
| 1.1.2 ZwA的抑菌活性与作用机理 | 第12-13页 |
| 1.1.3 ZwA对苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的增效活性与机理 | 第13-14页 |
| 1.1.4 ZwA的纯化方法 | 第14-15页 |
| 1.1.4.1 离子交换-高压纸相电泳法纯化ZwA | 第14页 |
| 1.1.4.2 离子交换-高效液相色谱法纯化ZwA | 第14-15页 |
| 1.2 Zwittermicin A和Kanosamine的生物合成途径 | 第15-24页 |
| 1.2.1 抗生素的合成途径 | 第15-16页 |
| 1.2.1.1 聚酮合成酶途径 | 第15-16页 |
| 1.2.1.2 非核糖体肽合成酶途径 | 第16页 |
| 1.2.1.3 聚酮合成酶-非核糖体肽合成酶杂合途径 | 第16页 |
| 1.2.2 ZwA生物合成基因簇与ZwA生物合成途径的研究进展 | 第16-24页 |
| 1.2.2.1 ZwA的抗性基因zmaR | 第16-17页 |
| 1.2.2.2 与ZwA生物合成相关的16 kb DNA序列 | 第17页 |
| 1.2.2.3 ZwA生物合成的全长基因簇 | 第17-18页 |
| 1.2.2.4 ZwA的生物合成途径 | 第18-24页 |
| 1.2.3 Kanosamine的生物合成途径简介 | 第24页 |
| 1.3 磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的研究进展 | 第24-27页 |
| 1.3.1 磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶的功能 | 第24-25页 |
| 1.3.2 载体蛋白简介 | 第25-26页 |
| 1.3.3 PPTase的特征和分类 | 第26-27页 |
| 1.3.4 验证PPTase功能的方法 | 第27页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第27-29页 |
| 2 材料和方法 | 第29-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-34页 |
| 2.1.1 菌株、质粒和引物 | 第29-33页 |
| 2.1.2 培养基 | 第33页 |
| 2.1.3 试剂 | 第33页 |
| 2.1.4 仪器 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-40页 |
| 2.2.1 DNA操作 | 第34-35页 |
| 2.2.1.1 DNA的体外重组操作 | 第34页 |
| 2.2.1.2 苏云金芽胞杆菌和蜡样芽胞杆菌质粒的少量提取 | 第34页 |
| 2.2.1.3 大肠杆菌质粒的少量提取 | 第34页 |
| 2.2.1.4 大肠杆菌CaCl2感受态的制备及转化 | 第34-35页 |
| 2.2.1.5 芽胞杆菌的电转化感受态的制备与电转化 | 第35页 |
| 2.2.2 蛋白质的表达、纯化与分子量测定 | 第35-37页 |
| 2.2.2.1 蛋白质的超量表达和纯化 | 第35-36页 |
| 2.2.2.2 蛋白质的SDS-PAGE检测 | 第36页 |
| 2.2.2.3 MALDI-TOF检测蛋白质的分子量 | 第36-37页 |
| 2.2.3 ZwA的纯化与检测 | 第37-38页 |
| 2.2.3.1 ZwA的初步纯化 | 第37-38页 |
| 2.2.3.2 ZwA的HPLC检测与HPLC制备柱纯化 | 第38页 |
| 2.2.3.3 ZwA的抑菌活性检测 | 第38页 |
| 2.2.3.4 ZwA的飞行时间质谱检测 | 第38页 |
| 2.2.4 序列分析 | 第38-40页 |
| 2.2.4.1 DNA的测序与序列分析 | 第38-39页 |
| 2.2.4.2 蛋白序列的分析 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-57页 |
| 3.1 构建ZwA生物合成基因簇中zmaS的插入缺失突变体 | 第40-44页 |
| 3.1.1 构建zmaS插入缺失突变载体 | 第40-41页 |
| 3.1.2 筛选zmaS插入缺失突变株 | 第41-43页 |
| 3.1.3 zmaS插入缺失突变株的胞外上清液中含有ZwA | 第43-44页 |
| 3.1.4 zmaS插入缺失突变株的抑菌活性 | 第44页 |
| 3.2 ZmaS对ZwA生物合成基因簇中的载体蛋白的修饰功能 | 第44-48页 |
| 3.2.1 ZwA生物合成基因簇编码的载体蛋白结构域的分析 | 第45页 |
| 3.2.2 构建ZmaS及载体蛋白结构域的表达载体 | 第45-46页 |
| 3.2.3 MALDI-TOF检测诱导表达的载体蛋白结构域的分子量 | 第46-48页 |
| 3.3 ZmaS对Kanosamine生物合成的影响 | 第48-55页 |
| 3.3.1 Kanosamine的生物合成基因簇的克隆 | 第49-51页 |
| 3.3.2 Kanosamine生物合成基因簇在BMB171中的异源表达 | 第51-53页 |
| 3.3.3 ZmaS对Kanosamine生物合成的影响 | 第53-55页 |
| 3.4 ZwA的纯化与检测 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-59页 |
| 5 总结 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 致谢 | 第66页 |
